[发明专利]一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法在审
| 申请号： | 201811148063.6 | 申请日： | 2018-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN109182265A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 卢刚;麻育源 | 申请（专利权）人： | 浙江省人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 33101 | 代理人： | 张羽振 |
| 地址： | 310014 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 颅骨 间充质干细胞 充质干细胞 细胞培养液 离心收集细胞 干细胞技术 基础培养液 未贴壁细胞 细胞培养瓶 血清替代物 研究和发展 典型特征 电动钻锯 高效分离 立方毫米 颅骨骨片 生理盐水 悬浮细胞 目筛网 换液 切碎 摇床 接种 过滤 补充 | ||
【权利要求书】：
1.一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法，其特征在于：使用电动钻锯将5cm3～15cm3颅骨骨片切碎至每片15～25立方毫米；加入20～30ml生理盐水，于低温摇床中慢摇，温度为4℃～10℃，转速为100～200转/分钟，摇10～15分钟；然后200～400目筛网过滤，收集滤液离心收集细胞；而后用细胞培养液悬浮细胞，所述的细胞培养液组成为含体积浓度1％～3％的血清替代物的MEM-alpha基础培养液；接种至细胞培养瓶中，置于37℃，含5％CO2培养箱中培养；48小时后换液，除去未贴壁细胞；而后每2～3天换新鲜的细胞培养液，长至80％～90％汇合时，消化传代，P3代细胞收集鉴定，即为纯化的颅骨间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的从颅骨中分离间充质干细胞的方法，其特征在于：所述筛网目数为200目。
3.根据权利要求1所述的从颅骨中分离间充质干细胞的方法，其特征在于：收集滤液离心收集细胞时，滤液1000rpm离心6分钟。
4.根据权利要求1所述的从颅骨中分离间充质干细胞的方法，其特征在于：所述的细胞培养液组成为含体积浓度2％的血清替代物的MEM-alpha基础培养液。
5.根据权利要求1所述的从颅骨中分离间充质干细胞的方法，其特征在于：细胞培养液悬浮后，以2×105/cm2密度接种至25cm2塑料细胞培养瓶中。
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