[发明专利]一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法

说明书

本发明涉及一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法，使用电动钻锯将5cm³～15cm³颅骨骨片切碎至每片15～25立方毫米；加入20～30ml生理盐水，于低温摇床中慢摇，温度为4℃～10℃，转速为100～200转/分钟，摇10～15分钟；然后200～400目筛网过滤，收集滤液离心收集细胞；而后用细胞培养液悬浮细胞，所述的细胞培养液组成为含体积浓度1％～3％的血清替代物的MEM‑alpha基础培养液；接种至细胞培养瓶中，置于37℃，含5％CO₂培养箱中培养；48小时后换液，除去未贴壁细胞。本发明的有益效果是：本发明所述方法从颅骨中快速高效分离得到具备典型特征的颅骨间充质干细胞，补充了间充质干细胞新的来源，有利于促进干细胞技术的研究和发展。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是一类具有自我更新和分化能力的成体干细胞，具有易于分离培养、多种因子分泌功能以及免疫调节功能等诸多优点，是目前干细胞领域的研究热点。诸多研究表明MSCs在组织损伤修复和各种疾病治疗方面有良好的应用前景，包括参与骨、软骨和肌腱等组织缺损修复、改善心肌梗死模型的心脏功能、降低急性肺损伤程度、促进糖尿病模型中的葡萄糖调节恢复、降低药物诱导的肝纤维化水平、以及促进神经元再生、皮肤再生和伤口愈合等。研究已经发现在髂骨、脐带、脂肪等多种组织中存在MSCs，但尚未见在颅骨中分离和鉴定MSCs的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足，提供一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法。

一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法，其特征在于：使用电动钻锯将5cm³～15cm³颅骨骨片切碎至每片15～25立方毫米；加入20～30ml生理盐水，于低温摇床中慢摇，温度为4℃～10℃，转速为100～200转/分钟，摇10～15分钟；然后200～400目筛网过滤，收集滤液离心收集细胞；而后用细胞培养液悬浮细胞，所述的细胞培养液组成为含体积浓度1％～3％的血清替代物的MEM-alpha基础培养液；接种至细胞培养瓶中，置于37℃，含5％CO₂培养箱中培养；48小时后换液，除去未贴壁细胞；而后每2～3天换新鲜的细胞培养液，长至80％～90％汇合时，消化传代，P3代细胞收集鉴定，即为纯化的颅骨间充质干细胞。

作为优选：所述筛网目数为200目。

作为优选：收集滤液离心收集细胞时，滤液1000rpm离心6分钟。

作为优选：所述的细胞培养液组成为含体积浓度2％的血清替代物的MEM-alpha基础培养液。

作为优选：细胞培养液悬浮后，以2×10⁵/cm²密度接种至25cm²塑料细胞培养瓶中。

本发明的有益效果是:本发明所述方法从颅骨中快速高效分离得到具备典型特征的颅骨间充质干细胞，补充了间充质干细胞新的来源，有利于促进干细胞技术的研究和发展。

附图说明

图1为本发明分离获得的颅骨MSCs形态图。

图2为本发明分离获得的颅骨MSCs流式细胞术检测表面标志图。

图3为本发明分离获得的颅骨MSCs三系分化结果检测图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步描述。下述实施例的说明只是用于帮助理解本发明。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。