[发明专利]痛风性关节炎动物模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种痛风性关节炎动物模型的构建方法，包括以下步骤：（1）尿酸盐结晶混悬液的制备；（2）高尿酸血症基础动物模型的建立；（3）痛风性关节炎动物模型的建立；本发明选择SPF鸡作为实验动物，通过高蛋白高钙饲料喂养建立高尿酸血症模型，将尿酸盐晶体混悬液注入高尿酸血症模型鸡的膝关节腔，最大程度模拟痛风性关节炎病人的体内微环境，建立了一种更符合人体内环境的痛风性关节炎动物模型。

技术领域

本发明涉及医学动物模型研究领域，具体涉及一种痛风性关节炎动物模型的构建方法。

背景技术

痛风性关节炎是因嘌呤代谢紊乱导致尿酸盐结晶体(monosodium uratecrystal，MUC)沉积于关节内外组织所引起的炎性反应性疾病。主要临床表现为反复发作性关节红、肿、热、痛与功能障碍，严重的会引起关节畸形。发病机制是关节内尿酸浓度过饱和形成结晶，脱落的结晶触发机体固有免疫反应，引起肥大细胞、单核巨噬细胞系统的活化，通过一系列复杂的细胞内级联反应分泌白细胞介素及肿瘤坏死因子，引发急性炎症反应。急性发作具有自限性的特点，但易反复发作，长期的 MUC 沉积于关节滑膜、软骨、关节囊等部位可导致其破坏溶解，从而逐渐产生对骨与关节的破坏。MUC 持续存在成为痛风性关节炎反复发作最直接的因素，如何彻底去除已沉积在关节腔内的 MUC 成为控制痛风性关节炎反复发作的关键。

痛风性关节炎动物模型是研究痛风发病及治疗的一种重要手段。目前，痛风的动物模型最经典的是微晶尿酸钠型大鼠痛风性关节炎模型和家兔急性痛风性关节炎模型。但是，啮齿、哺乳类动物体内尿酸代谢与人类有很大区别，它们体内的尿酸可以继续通过尿酸酶等进一步分解成尿囊素。尿囊素为无毒物质，水溶性良好，极易随尿排出体外，很少在体内蓄积，不产生结晶，也不会在组织内沉积形成痛风石而造成损害。而人体由于缺乏尿酸酶，尿酸是机体嘌呤代谢的最终产物，大部分以尿酸的形式从尿中排出，仅有很少一部分(约为 1/20)被分解为尿囊素、氨等。由于上述尿酸代谢差异存在，使得现有痛风性关节炎动物模型与人体内环境差异大，而影响研究效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种更符合人体内环境的痛风性关节炎动物模型的构建方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种痛风性关节炎动物模型的构建方法，包括以下步骤：

（1）尿酸盐结晶混悬液的制备；

（2）高尿酸血症基础动物模型的建立；

（3）痛风性关节炎动物模型的建立；

所述步骤（1）中尿酸盐结晶混悬液由以下方法获得：a.将手术中从痛风病人手足处取得的痛风石，置于温箱内烘干，后将白色结晶置入洁净烧杯中，放入蒸馏水，用玻棒搅拌数分钟，待其基本完全溶解，用漏斗垫上滤纸过滤掉沉渣及杂质，后把溶液置于温箱内烘干，得到尿酸盐结晶；将尿酸盐晶体研磨粉碎后，用孔径 250um 的金属网筛过滤，制作成纯化尿酸盐结晶备用；

b.将上述纯化的尿酸盐结晶置于180℃高温灭菌箱3h，然后用体积分数为95%的乙醇洗涤，2000r/min离心15min 3次，室温自然干燥，于超净台上取500mg尿酸盐晶体加9ml生理盐水、1ml吐温80，加热搅拌，配成10ml 50mg/ml尿酸盐溶液。

所述步骤（2）中实验动物选择健康的 30 日龄雄性 SPF鸡，体重500g±50g，适应性喂养 2 周后，开始用高蛋白质高钙饲料饲喂，当SPF 鸡出现痛风的表现后抽取其翅静脉血，分离血清，磷钨酸比色法测血尿酸值，以血尿酸大于 80 mg/ L 的 SPF 鸡作为高尿酸血症基础模型鸡。

所述步骤（3）中实验动物选择步骤（2）中获得高尿酸血症基础模型鸡，麻醉后，消毒左侧膝关节，将 0.5ml 质量浓度为 50mg/ml 的尿酸盐晶体混悬液，注入膝关节腔，伸曲、旋转运动 10min。