[发明专利]一种全自动核酸单链制备方法

权利要求书

1.一种基因检测的方法，其特征在于，包括全自动核酸单链制备方法，以及杂交检测步骤：

全自动核酸单链制备方法包括：

将待处理的标记了生物素的核酸扩增产物和试剂加入加样板中，其特征在于，将加样板放入核酸提取仪内，启动预先设置好的程序，按以下(1)-(4)的步骤完成全自动核酸单链制备：

(1)核酸提取仪按照预先设置好的混匀参数，将待处理的标记了生物素的核酸扩增产物和结合液的混合物进行混匀，获得混匀液A；所述的生物素为维生素B7；混匀参数为上下往复敲打混匀30s-20min，混匀频率为450次/分；

(2)核酸提取仪按照预先设置好的磁吸参数，从磁珠液中吸取磁珠，并加入到混匀液A中，再按照预先设置好的混匀参数进行混匀，获得混匀液B，所述磁珠表面偶联有可识别生物素的功能基团，使标记了生物素的核酸富集包被到磁珠表面；所述功能基团为链霉亲和素、中性链亲和素、卵白亲合素、链亲合素、卵黄亲合素或其组合；

(3)核酸提取仪按照预先设置好的磁吸参数，从混匀液B吸取包被了核酸的磁珠，并加入到变性溶液中，再按照预先设置好的混匀参数进行混匀，获得混匀液C，使富集包被到磁珠表面的双链核酸变成单链核酸；所述变性溶液用尿素、甲酰胺、甲醇、乙醇中的一种或几种来配置

(4)核酸提取仪按照预先设置好的磁吸参数，从混匀液C吸取包被了单链核酸的磁珠，加入到后续反应液中；

步骤(2)-(4)中所述的混匀参数包括频率和动作进行的任意组合，在频率上包括连续式、间歇式或周期式；在动作上包括往复吹吸式、上下往复敲打式、水平振荡式或水平旋转拍打式；

杂交检测步骤包括：(5)核酸提取仪按照预先设置好的磁吸参数，吸取步骤(4)包被了单链核酸的磁珠，加入到杂交反应液中，然后以预先设置好的混匀参数混匀；

(6)将制备好的杂交混合物加到微阵列芯片表面，孵育；

(7)使用芯片洗干仪清洗芯片，然后用离心机甩干；

(8)使用微阵列芯片扫描仪和基因检测分析系统进行信号读取及结果判断。

2.根据权利要求1所述的基因检测方法，其特征在于，步骤(1)所述的核酸扩增产物为PCR扩增、等位基因特异性PCR、链置换扩增、基于核酸序列扩增、滚环扩增或环介导等温扩增方法扩增的产物。

3.根据权利要求1所述的基因检测方法，其特征在于，步骤(2)-(4)所述磁吸的参数为永磁铁吸附富集磁珠或电磁铁吸附富集磁珠。

4.根据权利要求1所述的基因检测方法，其特征在于，所述磁珠为可磁化的微小颗粒，颗粒的直径为0.1μm～10μm。