[发明专利]用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统及制备方法

权利要求书

1.一种用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统，其特征在于，以磷酸钙作为内核包载核酸类药物，通过疏水结合的途径在外层包裹脂质体并自组装全段的人重组蛋白，构建低毒的高密度脂蛋白仿生化纳米系统(siR-CaP-HDL)，靶向递送药物于肿瘤部位；所述纳米系统通过下述方法制备：

利用反相微乳法将siRNA包载于磷酸钙内核，随后通过薄膜水化法将磷脂包裹于内核外层形成脂质体，再与ApoE3自组装形成均一稳定的仿生化纳米系统(siR-CaP-HDL)。

2.按权利要求1所述的用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统，其特征在于，所述磷酸钙内核包载的核酸类药物是针对于胰腺癌细胞Kras^G12D突变的siRNA，其序列为5’-GUUGGAGCUGAUGGCGUAGTT-3’。

3.按权利要求2所述的用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统，其特征在于，所包载的核酸类药物还选自DNA,RNA，寡聚核苷酸CpG ODN。

4.按权利要求1所述的用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统，其特征在于，所述的内层磷脂选用与多价离子具有很强络合能力的两亲性磷脂1,2-油酰磷脂酸(DOPA)，其磷酸极性头部在油水界面与磷酸钙纳米粒的钙离子络合，疏水性尾部分布在油相，在纳米粒表面形成一层疏水层以稳定纳米粒。

5.按权利要求1所述的用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统，其特征在于，所述的外层磷脂选用二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)。

6.按权利要求1所述的用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统，其特征在于，所述的载脂蛋白选用全段的人重组ApoE3蛋白，其与DMPC形成的脂质体自组装形成的高密度脂蛋白仿生结构能模拟体内高密度脂蛋白的结构和功能特性，粒径较小、均一稳定，毒性较小，且在体内循环时间较长，生物相容性良好；

所述ApoE3与肿瘤细胞高表达的LDLR和LRP1结合，介导纳米系统转运至细胞内。

7.按权利要求1所述的用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统，其特征在于，所述纳米系统为核壳结构的仿生纳米粒子，由磷酸钙构成的内核载药，脂质双分子层与载脂蛋白自组装作为外壳。

8.按权利要求1所述的用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统，其特征在于，其中纳米粒构建方法包括：

①以反相微乳法制备包载siRNA的磷酸钙内核，反相微乳是由水溶液分散到含有壬基酚聚氧乙烯醚的环己烷油相溶液中制得，随后用内层磷脂DOPA修饰，分散于氯仿中备用；

②薄膜水化法制备外层，将预先制备的磷酸钙内核、脂质膜材料共同成膜，水化之后加入ApoE3恒温摇床孵育，得到自组装的基于磷酸钙内核的高密度脂蛋白仿生化纳米粒。