[发明专利]用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统及制备方法

说明书

本发明属于药物制剂领域，涉及用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统及制备方法，所述纳米系统以磷酸钙作为内核包载核酸类药物，通过疏水结合的途径在外层包裹脂质体并自组装全段的人重组蛋白，构建低毒的高密度脂蛋白仿生化纳米系统(siR‑CaP‑HDL)，靶向递送药物于肿瘤部位，并使siRNA药物充分释放以提高药效。本发明构建的高密度脂蛋白纳米粒可规避单核吞噬系统，在体循环中长时间保持稳定；组装的载脂蛋白ApoE3能与胰腺癌肿瘤细胞表面高表达的LDLR和LRP1结合，形成大胞饮体在胞内转运后与溶酶体融合并破裂，释放出siRNA至胞浆发挥基因沉默作用。本发明的仿生化纳米粒安全性好，细胞毒性较小，能高效低毒地发挥抗肿瘤作用，具有较高的临床应用及转化价值。

技术领域

本发明属于仿生化纳米制剂技术领域，涉及一种低毒仿生化纳米系统，具体涉及用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统及制备方法，该纳米系统用于递送核酸类药物。

背景技术

现有技术公开了胰腺癌作为一种消化道恶性肿瘤，致死率高，患者的五年生存率不足6％且预后极差。由于胰腺癌早期诊断困难和病程发展快，手术切除率低，术后五年生存率很低。临床实践中，化疗是胰腺癌治疗的重要环节，吉西他滨是一线化疗用药，但是作为一种核苷类似物，已有报道其具有很高的肾毒性；此外，FOLFIRINOX治疗方案(奥沙利铂+伊立替康+5-氟尿嘧啶)虽能提高患者响应，但具有更大的毒副作用，所以目前胰腺癌的化学治疗需要探索新思路。

近年有研究发现，约80％的胰腺癌存在Kras信号突变的现象，肿瘤通过这种突变改变摄取营养的方式，即特异性刺激大胞饮机制的过度激活，从而介导摄取大量胞外蛋白类营养物质至胞内降解为氨基酸，维持肿瘤细胞增殖的需要；但Kras信号属于非成药性的靶点，故选用核酸类药物如DNA和RNA具有巨大的治疗潜能；DNA在递送过程中易降解并在胞质中转运困难，另外其无法进入细胞核而使转运效率降低；而具有沉默疾病相关基因作用的siRNA在胞质中发挥作用，因此与DNA相比，siRNA具有更高的应用价值；然而，siRNA本身不稳定且在血浆中易代谢，

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟基于仿生学原理设计提供一种高密度脂蛋白纳米递释系统，具体涉及用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统及制备方法，以使所递送的药物能够高效低毒地发挥抗肿瘤作用。

发明内容

本发明的目的在于基于现有技术的现状，提供一种高密度脂蛋白纳米递释系统，具体涉及用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统及制备方法，所述纳米系统以磷酸钙作为内核包载核酸类药物，通过疏水结合的途径在外层包裹脂质体并自组装全段的人重组蛋白，构建低毒的高密度脂蛋白仿生化纳米系统(siR-CaP-HDL)，靶向递送药物于肿瘤部位，并使siRNA药物充分释放以提高药效。

具体的，本发明的用于提高胰腺癌疗效的低毒仿生化纳米系统，利用反相微乳法将siRNA包载于磷酸钙内核，通过薄膜水化法将磷脂包裹于内核外层形成脂质体，再与ApoE3自组装形成均一稳定的仿生化纳米系统(siR-CaP-HDL)，所采用的磷酸钙构建纳米粒内核，包载核酸类药物siRNA具有较高的稳定性和包载效率；该纳米系统具有提高靶向肿瘤部位的效果。

本发明中，采用的模型药物为针对胰腺癌细胞Kras^G12D突变的核酸类药物siRNA，磷酸钙内核包载siRNA，具体序列为5’-GUUGGAGCUGAUGGCGUAGTT-3’，通过静电吸附作用与磷酸钙内核的钙相结合；当载药颗粒递送到细胞之后，磷酸钙内核由于溶酶体的酸性环境解离出钙离子，导致溶酶体肿胀而破裂，所载的siRNA从溶酶体中逃逸至细胞胞浆，具有强烈的基因沉默效应。

本发明纳米系统中高效包载核酸类药物，例如DNA,RNA，寡聚核苷酸CpG ODN等，其作为一种新型的基因载体，被证实具有良好的生物安全性。