[发明专利]一种猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液的制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明将猪脾脏、鸡法氏囊和水混合后匀浆，得到的匀浆液反复冻融5～7次后与乙酸混合后依次进行搅拌、离心、灭活和水解，将得到的灭活水解液超滤、除菌，得到无菌液浓缩至无菌调节液体积的19～21％，得到猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液。本发明提供的制备方法制备得到的猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液中核糖多肽含量高，且本发明制备的猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液配合猪瘟活疫苗使用可以大大提高猪只的抗体水平。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液的制备方法和应用。

背景技术

转移因子是由动物蛋白细胞中具有免疫获悉的T淋巴细胞所释放的一类小分子可透析物质，可溶于水，能诱导机体免疫细胞活化，增强机体免疫力，能转移包括病毒、细菌、真菌、寄生虫、组织相容性抗原和肿瘤抗原等多种抗原的细胞免疫。由于转移因子使用安全、作用迅速、无抗原性同时作为免疫激发剂和辅助制剂可显著提高对动物疾病的预防和控制效果。

法氏囊(Bursa offabricius，BF)是禽类特有的体液免疫的中枢淋巴器，是B淋巴细胞增殖分化的场所，在免疫系统中发挥重要作用。从法氏囊中新分离的数十种生物活性肽，表现出不同的生物学功能，奠定了法氏囊在免疫系统中的地位。将法氏囊素作为免疫增效剂用作动物疫苗佐剂可以大大提高疫苗效果，增强动物的免疫力。但市面上的转移因子制剂和法氏囊素制剂有效成分浓度都相对较低，使用后达不到理想的效果。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液的制备方法，使制备得到的猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液核糖和多肽含量高，能够有效提高抗体水平。

为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液的制备方法和应用，包括如下步骤：

1)将猪脾脏、鸡法氏囊和水混合后匀浆，得到匀浆液；

2)将所述步骤1)的匀浆液反复冻融5～7次，得到冻融液；

3)将所述步骤2)的冻融液离心，将得到的上清液采用β-丙内酯灭活，得到灭活液；

4)将所述步骤3)的灭活液在35～42℃条件下进行水解1～3h后离心，得到水解上清液；

5)将所述步骤4)的水解上清液进行超滤、除菌，将得到的无菌液浓缩，得到猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液；所述浓缩后的混合液的体积为无菌液体积的19％～21％。

优选的，所述步骤1)中猪脾脏的质量、鸡法氏囊的质量与水的体积比为(0.5～1.5):(0.5～1.5):(1～4)。

优选的，所述步骤1)中匀浆的转速为15000～18000r/min，匀浆的时间为9～11min。

优选的，所述步骤2)中反复冻融时，冷冻的温度独立为-22～-18℃；融解的温度独立为20～30℃。

优选的，按体积百分比计，所述步骤3)灭活液中β-丙内酯的终浓度为0.014～0.016％；所述灭活的温度为5～15℃，所述灭活的时间为20～30h。

优选的，所述步骤5)超滤使用的超滤膜的截留分子量为5～8kD。

优选的，所述步骤5)中除菌的方式为采用除菌过滤器进行过滤除菌，所述除菌过滤器的滤膜孔径为0.1μm。

优选的，所述步骤5)中浓缩的温度为9～11℃。

本发明提供了一种上述方案所述方法制备得到的猪脾转移因子与鸡法氏囊素混合液。