[发明专利]一种用于定量测定粪便中幽门螺杆菌抗原试剂的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于定量测定粪便中幽门螺杆菌抗原试剂的制备方法，包括制备R2试剂的步骤：S1、提取幽门螺杆菌抗原(尿素酶)蛋白，将尿素酶基因克隆到pGEX‑4T‑1质粒中，通过大肠杆菌发酵表达，经过亲和层析纯化得到重组幽门螺杆菌抗原(尿素酶)；S2、制备抗幽门螺杆菌抗原(尿素酶)多克隆抗体；S3、制备包被抗幽门螺杆菌抗原(尿素酶)多克隆抗体的乳胶颗粒；S4、分散于缓冲溶液得到R2试剂。该方法是乳胶增强免疫比浊法，制得的试剂是一种可直接通过粪便检测幽门螺杆菌的溶液，仅需粪便样品即可完成检测，取样方便，对人体无安全隐患，检测效率高、稳定性好，特异性强，不易受干扰。

技术领域

本发明属于医疗检测方法技术领域，涉及一种快速定量测定粪便中幽门螺杆菌抗原(尿素酶)的方法，具体地说涉及一种乳胶免疫比浊法快速定量测定粪便中幽门螺杆菌抗原的试剂的制备方法。

背景技术

大量研究表明，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎、消化性溃疡的重要病因，且与胃癌、胃粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤密切相关。目前，临床上已有多种方法评价Hp感染与否，主要分为两大类：侵入性和非侵入性检测方法。

其中，侵入性检测方法是使用内窥镜取得胃活检组织后进行检测，一般包括脲酶试验法、病理学检测法及细菌培养法。快速脲酶试验法依据幽门螺杆菌具有丰富的可分解尿素的尿素酶，尿素酶可分解尿素产生氨气，通过 pH的变化测定幽门螺杆菌，该方法简便迅速，但是存在准确度不足的问题，可能因含尿素酶的其它细菌存在而产生假阳性或者检测近期试用过降低胃部细菌量或直接抑制尿素酶活性的药物的样品可产生假阴性。病理学检测法通过对胃粘膜组织切片染色检查，可直接显示幽门螺杆菌菌体而证实，但是不同病理学家观察的差异性对于胃萎缩样品的诊断具有一定的困难性。细菌培养法通过取胃粘膜组织做幽门螺杆菌培养，但是存在培养细菌较少、操作过程复杂、费用昂贵的问题。另外，侵入性检测方法还存在内窥镜侵入待检测者体内导致待检测者痛苦或易产生感染的问题。

非侵入性检测方法指不通过胃镜取活检标本诊断幽门螺杆菌标本感染的方法。这类方法包括血清抗体检测、13C/14C呼气试验等。血清抗体检测目前已有的方法包括酶联免疫法、免疫印迹法、胶体金法等，但是由于根除幽门螺杆菌后人体血清中仍然含有对应的抗体，因此通过血清抗体来判定幽门螺杆菌感染存在特异性问题，不能真实反映出胃部是否还有幽门螺杆菌存在。13C/14C呼气试验作为一种检测幽门螺杆菌感染的方法，在临床上广泛应用，但是存在放射性问题，同时需要专门的设备，因此在家庭和社康中心的应用就受到很大限制。

本发明采用粪便标本进行测试，通过专用的定量粪便取样器采集幽门螺杆菌抗原(尿素酶)，通过乳胶增强免疫比浊法测定幽门螺杆菌的含量，具有方便快捷并且清洁卫生的特点，可以在家庭和社康中心广泛应用。乳胶增强免疫比浊法是一种通过将抗体偶联到一定粒径的乳胶颗粒上，与标本中抗原反应后形成抗原-抗体-乳胶颗粒的复合物而形成一定的浊度，测定浊度的变化从而判定标本中抗原浓度的方法。目前，幽门螺杆菌已经被世界卫生组织确定为I类致癌病原，因此如何制备一种可快速无侵害性检测幽门螺杆菌的试剂成为目前亟待解决的问题。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于通过乳胶增强免疫比浊法，快速定量检测粪便中幽门螺杆菌抗原(尿素酶)。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

本发明提供一种用于定量测定粪便中幽门螺杆菌抗原试剂的制备方法，其包括制备R2试剂的步骤：

S1、提取幽门螺杆菌抗原蛋白，将尿素酶基因克隆到质粒中，通过大肠杆菌发酵表达，得到重组幽门螺杆菌抗原；

S2、制备抗幽门螺杆菌抗原多克隆抗体；

S3、制备包被抗幽门螺杆菌抗原多克隆抗体的乳胶颗粒；