[发明专利]检测TSC1第15号外显子位点突变的引物、方法和试剂盒

说明书

检测TSC1第15号外显子位点突变的引物、方法和试剂盒。本发明公开了检测TSC1第15号外显子的引物，包括扩增TSC1第15号外显子位点的引物；采用Sanger测序技术，可用于快速检测结节性硬化症患者体内TSC1第15号外显子位点突变情况。利用本发明完成的检测结果准确，不仅可以辅助诊断热点区域的突变情况，还可以作为判断突变位点对相关疾病影响的标准。TSC1基因的非激活突变会引起错构瘤蛋白功能异常，影响其细胞分化调节功能，从而导致外胚层、中胚层和内胚层细胞生长和分化的异常，且突变可遗传。可以辅助诊断遗传性结节性硬化症情况，对早期干预、早期治疗和产前诊断有重要的参考意义。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测TSC1第15号外显子位点突变的引物，采用普通PCR技术，可用于快速检测结节性硬化症患者体内TSC1第15号外显子位点的突变情况。

背景技术

结节性硬化症又称Bourneville病，是一种常染色体显性遗传的神经皮肤综合征，也有散发病例，多由外胚叶组织的器官发育异常，可出现脑、皮肤、周围神经、肾等多器官受累，临床特征是面部皮脂腺瘤、癫痫发作和智能减退。发病率约为1/6000活婴，男女之比为2：1。2018年5月11日，国家卫生健康委员会等5部门联合制定了《第一批罕见病目录》，结节性硬化症被收录其中。根据基因定位可分为四型：TSC1、TSC2、TSC3、TSC4。其中TSC1基因位于9号染色体，由23个外显子和22个内含子组成，在体内作为抑癌基因广泛表达，表达产物为Hamartin和Tuberin直接相互作用形成异二聚体(TSC1/TSC2)而起作用。TSC1和TSC2突变可导致一种显性遗传性多系统并发症，即复合型结节性硬化症(tuberous sclerosiscomplex，TSC)，具有很高的表现度和多样的并发表征，成人和小孩分别有1/8 000和1/6000的几率受到TSC的影响。许多疾病相关的突变位于TSC1蛋白的N端约265个氨基酸的保守区域，TSC1基因在该区域中的一些突变是错义突变，但只有少部分确实诱发疾病的产生，这些致病突变导致细胞中TSC1蛋白丧失。TSC1/TSC2能响应生长因子、胰岛素及各类环境胁迫信号，并发挥其靶向小G蛋白Rheb的GAP(gtpase active protein，GAP)活性，经由Rheb/mtorc1(mammalian target of rapamycin complex1)模式信号途径来调控细胞生长、分化及迁移并在胚胎发育及机体代谢过程中发挥重要的功能。TSC2：TSC1复合物在mTOR通路中的作用，如图1所示。PI3K通过与受体的直接相互作用或通过与支架蛋白(如IRS蛋白)的相互作用而被生长因子激活。这些相互作用使PI3K募集底物PIP2，从而产生脂质第二信使PIP3。Akt和PDK1通过PIP3与细胞质膜结合。使Akt的Thr308被PDK1磷酸化和Ser473被mTORC1磷酸化(未示出)而激活。一旦激活，Akt会磷酸化许多下游目标，包括TSC2上的多个位点。TSC2的磷酸化会抑制TSC2：TSC1复合物的GTPase活性，从而使Rheb-GTP积累。过量的Rheb-GTP激活高水平的mTORC1，进而磷酸化并抑制4E-BP1活性，激活S6K1和S6K2。综述TSC1和TSC2的分子遗传特性及其产物TSC1/TSC2在细胞生长调控中的作用。