[发明专利]用于评估抗流感病毒药物药代动力学和药效学的树鼩模型的构建方法

权利要求书

1.一种用于评估抗流感病毒药物药代动力学和药效学的树鼩模型的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)树鼩服用所述抗流感病毒药物后于不同时间取血浆用于药代动力学分析，获得所述抗流感病毒药物在树鼩的药代动力学参数，并与所述抗流感病毒药物在人、雪貂、小鼠、大鼠等动物体内的药代动力学参数比较；

(2)树鼩经鼻接种流感病毒，服用所述抗流感药物，观察鼻腔症状，收集感染后第1、3和5天鼻灌洗行病毒TCID50检测以及对鼻灌洗液沉淀细胞分类计数，感染后21天后检测血清中和抗体滴度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗流感病毒药物是奥司他韦。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗流感病毒药物是磷酸盐奥司他韦。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述树鼩为中缅树鼩。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述服用为经口灌胃口服方式。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，树鼩禁食12h后，经口灌胃给予奥司他韦10mg/kg，首次灌胃给药后记录给药时间，分别于给药后0.25、0.5、1、1.5、2、4、6、8和12小时经尾静脉或股静脉采血0.5ml，采集到的血液置于含肝素离心管中,1500g4℃离心10min获得待测树鼩血浆；称取适量磷酸奥司他韦、羧基奥司他韦及内标帕拉米韦，用90％v/v甲醇水溶液制成1mg/mL储备液，其中磷酸奥司他韦折算成奥司他韦浓度，然后用甲醇逐级稀释成梯度工作溶液；内标帕拉米韦用甲醇配成1μg/mL的工作溶液；分别取10μL磷酸奥司他韦工作溶液和羧基奥司他韦工作溶液，加入50μL空白树鼩血浆，再加入130μL含内标帕拉米韦的工作溶液，涡旋混合离心取上清液进样分析获得磷酸奥司他韦和羧基奥司他韦梯度血浆浓度，制备标准曲线，待测树鼩血浆按上述空白树鼩血浆方法处理和进样分析，经线性拟合，获得的待测树鼩血浆的奥司他韦药代动力学参数。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，树鼩经鼻接种病毒过程为腹腔注射3％戊巴比妥钠溶液麻醉后经鼻灌注0.25ml流感病毒。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流感病毒是人流感病毒H1N1和/或禽流感病毒H9N2。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，接种流感病毒的树鼩于病毒接种前2小时经口灌胃服用奥司他韦，每日给药两次，连续给药5天，每日观察树鼩鼻部症状，感染后第1，3和5天树鼩经腹腔注射3％戊巴比妥钠溶液麻醉后，吸取600μL无菌PBS，从树鼩一侧鼻孔缓慢滴入，用90mm²平皿收集鼻灌洗液，鼻灌洗液经800g离心取上清适量分装用于检测病毒滴度TCID50，鼻灌洗液沉淀进行细胞分类计数。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，病毒感染树鼩鼻灌洗液病毒滴度TCID50检测过程包括鼻灌洗液10倍倍比稀释成10^-1、10^-2……10^-7梯度浓度，加入长满单层MDCK细胞的96孔板中培养48小时，观察致细胞病变，并采用血凝实验验证结果，采用Reed-Muench计算病毒半数致死滴度TCID₅₀。