[发明专利]一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件在审
| 申请号： | 201811166948.9 | 申请日： | 2018-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN109371046A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 徐俊;宋庆浩 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/65 | 分类号： | C12N15/65;C12N15/74 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 庄文莉 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 嗜热微生物 遗传操作 抗毒素 毒素 诱导型 选择标记 热稳定 分子遗传学研究 诱导型启动子 抗毒素基因 选择性标记 毒素基因 构建 正向 制备 携带 应用 | ||
1.一种热稳定的毒素-抗毒素选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述选择性筛选标记HHP-TAC包含来自于超嗜热古菌的高静水压力诱导型启动子、热稳定性毒素基因和抗毒素基因、组成型启动子以及HMG-CoA还原酶基因。
2.根据权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述组成型启动子包括组成型启动子PhmtB和组成型启动子Pgdh。
3.根据权利要求2所述的选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述组成型启动子PhmtB和组成型启动子Pgdh来源于质粒pTS535。
4.根据权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述诱导型启动子是来自于超嗜热古菌Pyrococcus yayanosii的高静水压力诱导型启动子Phhp；热稳定性毒素和抗毒素的编码基因分别来自于超嗜热古菌P.furiosus的PF0776基因和PF0775基因。
5.根据权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述选择性筛选标记HHP-TAC的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
6.一种如权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
使用融合PCR扩增技术，依次将高静水压力诱导型启动子与热稳定性毒素基因融合，组成型启动子与抗毒素基因融合，以及组成型启动子与HMG-CoA还原酶基因融合，获得所述选择性筛选标记HHP-TAC。
7.根据权利要求6所述的选择性筛选标记HHP-TAC的制备方法，其特征在于，所述高静水压力诱导型启动子为来自于超嗜热古菌Pyrococcus yayanosii的高静水压力诱导型启动子Phhp。
8.根据权利要求6所述的选择性筛选标记HHP-TAC的制备方法，其特征在于，所述热稳定性毒素基因为来自于超嗜热古菌P.furiosus的PF0776基因；所述抗毒素基因为来自于超嗜热古菌P.furiosus的PF0775基因。
9.一种根据权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC在嗜热微生物中的用途，其特征在于，所述选择性筛选标记HHP-TAC可在嗜热微生物的原养型中直接进行分子遗传操作。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述选择性筛选标记HHP-TAC中的高静水压力诱导型启动子用于控制蛋白的表达。
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