[发明专利]一种超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒及测定方法

权利要求书

1.一种超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：包括免疫层析试纸条和荧光微球标记的IL-6单克隆抗体溶液，其中IL-6单克隆抗体溶液中包含荧光微球标记的IL-6单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述试纸条包括底板、样本垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，硝酸纤维素膜设置在样品垫和吸水垫之间，硝酸纤维素膜上依次设置检测T线和质控C线。

3.根据权利要求2所述的IL-6荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述T线上包被IL-6单抗，C线上包被羊抗鼠IgG，样本中的待测物质IL-6与IL-6单抗-生物素-亲和素-荧光微球形成免疫复合物，再与T线的IL-6捕获抗体结合，未与T线反应的IL-6单抗-生物素-亲和素-荧光微球最后与C线上的羊抗鼠IgG形成羊抗鼠IgG-IL-6单抗-生物素-亲和素-荧光微球的免疫复合物。

4.根据权利要求1所述的超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述荧光微球分别是亲和素-时间分辨荧光微球、亲和素-量子点微球中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述IL-6单克隆抗体溶液包含荧光微球标记的IL-6单克隆抗体和特殊配制的微球保存液。

6.根据权利要求1所述的超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述荧光微球标记的IL-6单克隆抗体溶液制备方法包括以下步骤：

(1)使用生物素标记IL-6抗体并洗去多余未标记的生物素，取亲和素-荧光微球稀释至0.1-1.0％，混匀后加入标记生物素的IL-6单抗中，混合均匀后室温反应10-30分钟；

(2)加入0.5-2％BSA溶液，封闭反应0.5-2小时；

(3)使用PBS缓冲液清洗，再加入荧光微球保存液重悬，即得到IL-6单抗-生物素-亲和素-荧光微球，置2-8℃保存。

7.根据权利要求7所述的超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：亲和素-荧光微球是亲和素-时间分辨荧光微球、亲和素-量子点微球中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述免疫层析试纸条的制备方法包括以下步骤：

(1)采用三维点膜喷金仪，将IL-6单克隆抗体和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上，分别作为检测线T线和质控线C线，T线上包被IL-6单抗，C线上包被羊抗鼠IgG；

(2)在干燥箱中干燥后，将样本垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC粘性底板组装；

(3)切割成试纸条，加干燥剂于常温下密封保存。

9.一种采用权利要求1-9中任一项所述的试剂盒进行超灵敏IL-6荧光免疫层析测定方法，其特征在于：包括以下步骤；

(1)将IL-6单抗-生物素-亲和素-荧光微球稀释到工作浓度，用10mM的PBS缓冲液将IL-6标准品稀释形成系列梯度浓度的标准品，取标准品溶液，加入到层析试纸条的样本孔中，再加入荧光微球工作溶液，反应后，读取NC膜上T，C线信号并计算比值T/(T+C)，将标准品溶液的浓度进行对数转换后与比值进行线性拟合，得到标准品拟合曲线；

(2)将待测样本加入测试条的样本孔中，再加入荧光微球工作溶液，反应15分钟后，使用干式免疫荧光分析仪读取NC膜上T，C线荧光信号并计算比值T/(T+C)，将比值代入到标准品拟合曲线，计算出样本中IL-6的浓度。