[发明专利]一种超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒及测定方法

说明书

本发明涉及一种超灵敏IL‑6荧光免疫层析测定试剂盒和测定方法。试剂盒由荧光微球标记的IL‑6单克隆抗体溶液和免疫层析试纸条组成，IL‑6单克隆抗体溶液包含特定浓度的荧光微球，抗体与荧光微球通过生物素‑亲和素偶联。本发明提供的测定方法，测定线性范围1.72～1000pg/mL,线性相关系数为0.997；灵敏度为1.72pg/ml；精密度平均CV<10％；准确度平均回收率为97.5％；干扰试验血红蛋白浓度低于181.82mg/mL，甘油三脂浓度低于18.18mg/mL，胆红素浓度低于181.82ug/mL时，测试结果偏差落在可接受范围；特异性交叉干扰试验证明不存干扰。该方法检测IL‑6需时短，检测结果准确，操作流程简单，无需大型仪器设备，适用于基层医院及大医院门、急诊检验科。

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种IL-6荧光免疫层析测定试剂盒及测定方法。

背景技术

Il-6是一种多功能的细胞因子，可由体内多种细胞分泌产生，具有调节免疫应答、造血功能及急性期相反应。

IL-6作为感染性疾病新的标志物，倍受临床关注和重视。当机体感染早期， IL-6率先升高,2小时达高峰，早于CRP和PCT，其升高水平与细菌感染严重程度密切相关。

IL-6测定还可用于感染性疾病的预后判断，当IL-6>1000pg/mL时，提示预后不良；动态观察IL-6水平有助于了解感染性疾病的进展和患者对治疗的反应。

血液中IL-6的含量很低(pg/mL),一般方法难于测定。目前常应用酶联免疫法、发光免疫法及荧光免疫层析法进行检测。酶联免疫法测定IL-6仅在科研中较常用；罗氏及西门子公司大型发光免疫分析仪有常规定量测定IL-6的项目, 可为临床住院病人服务，但不适合门急诊及基层医院使用。

专利申请号为CN105445466A的中国发明公开了一种白介素6的检测方法及其试剂盒，描述了一种用荧光胶乳微粒作探针测定IL-6的荧光免疫层析法,适合用于门急诊及基层医院,但该方法测定IL-6的灵敏度达不到要求，最低检测限仅为 50pg/mL,而正常人参考值<7pg/mL,容易造成漏检误诊,使临床推广应用遇到问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种IL-6荧光免疫层析测定试剂盒和测定方法，达到超灵敏(IL-6≤2pg/mL)测定目标，本发明购买优质IL-6抗原；筛选了高效价的IL-6单克隆抗体；采用了生物素-亲和素放大系统；研究摸索了检测标本的最佳用量和反应检测时间。应用时间分辨荧光微球和量子点荧光微球作标记探针，建立了超灵敏IL-6荧光免疫层析测定方法。经方法学实验，该法灵敏度1.72pg/mL；精密度平均CV<10％；准确度平均回收率97.1％；测定线性范围 1.72～1000pg/mL；干扰样本中血红蛋白浓度低于181.82mg/mL，甘油三脂浓度低于18.18mg/mL，胆红素浓度低于181.82ug/mL时，干扰样本测试结果偏差低于可接受范围的10％；用浓度为200pg/mL的IL-2、IL-4、IL-8、IL-12的样本在IL-6测试条上进行测试，不存在特异性干扰；临床样本检测结果与西门子公司大型发光免疫分析仪测定结果基本一致(r＝0.9914)，既保留了传统胶体金试纸条的现场快速检测优点，又加入了灵敏度高、稳定性好、受自然荧光干扰低等优点，同时其配套使用的设备精巧，适合医院门诊、急诊检验科使用。可广泛应用于基层医院及大医院门、急诊检验科，可以超灵敏定量测定血液中IL-6的浓度，检测时间短，操作流程简单，无需大型仪器设备。

本发明提供了如下的技术方案：

一种超灵敏IL-6荧光免疫层析测定试剂盒，包括免疫层析试纸条和荧光微球标记的IL-6单克隆抗体溶液，其中IL-6单克隆抗体溶液中包括荧光微球标记的IL-6单克隆抗体。

优选的是，所述试纸条包括底板、样本垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，硝酸纤维素膜设置在样品垫和吸水垫之间，硝酸纤维素膜上依次设置检测T线和质控C线。