[发明专利]一种利用海洋硅藻共栖细菌发酵制备遗忘性贝毒软骨藻酸的方法

权利要求书

1.一种利用海洋硅藻共栖细菌发酵制备遗忘性贝毒软骨藻酸的方法，其特征在于，

包括以下步骤：

1）菌株活化：将斜面菌种接种到摇瓶种子液培养基中，在30-32℃下培养12-15h，得到活化菌株种子液；

菌种为海洋硅藻共栖细菌Ponticoccus sp. LZ-7，已于2017年10月18日保藏于中国典型培养物中心CCTCC，其保藏编号为：CCTCC AB 2017233；

摇瓶种子液培养基包括以下质量百分数的组分：酵母膏3-6%，蛋白胨2-5%，葡萄糖0.5-1%，余量为天然海水；

2）种子液准备：向种子培养液中通入蒸汽加热，121-123℃灭菌25-35min，冷却至30-31℃，采用火种接种法将活化菌株种子液接种到种子培养液中，通气搅拌，通气量为40-50 L/min，搅拌速率为160-180r/min，30-33℃下恒温培养15-18h，得到种子液；

种子培养液包括以下质量百分数的组分：

酵母膏3-6%，蛋白胨2-5%，葡萄糖0.5-1%，余量为天然海水；

3）发酵：向发酵液中通入蒸汽加热，121-123℃灭菌25-35min，冷却至30-31℃，将步骤2）得到的种子液接种到发酵液中，通气搅拌，通气量为40-60L/min，搅拌转速140-160r/min，30-33℃下恒温培养48-52h，得到遗忘性贝毒软骨藻酸发酵液；

发酵液包括以下质量百分数的组分：

酵母膏5-10%，蛋白胨3-6%，葡萄糖3-6%，精氨酸0.05-0.1%，氯化钾0.2-0.3%，氯化钙0.02-0.05%，余量为天然海水；

4）提取：将遗忘性贝毒软骨藻酸发酵液进行板框过滤得到菌体，加入甲醇溶液，静置10-20min，过滤，得到一次提取液和过滤菌体；将过滤菌体加入甲醇溶液中，静置10-20min，过滤，得到二次提取液和过滤菌体；将过滤菌体加入甲醇溶液中，静置10-20min，过滤，得到三次提取液，将一次提取液、二次提取液和三次提取液合并，旋蒸浓缩，得到遗忘性贝毒软骨藻酸粗提物；

5）纯化：将遗忘性贝毒软骨藻酸粗提物进行洗脱，收集遗忘性贝毒软骨藻酸组分，旋转蒸发，除去溶剂，得到白色粉末，即为遗忘性贝毒软骨藻酸。

2.根据权利要求1所述的一种利用海洋硅藻共栖细菌发酵制备遗忘性贝毒软骨藻酸的方法，其特征在于，所述步骤2）中活化菌株种子液接种量为10-15%。

3.根据权利要求1所述的一种利用海洋硅藻共栖细菌发酵制备遗忘性贝毒软骨藻酸的方法，其特征在于，所述步骤3）中种子液接种量为2-5%。

4.根据权利要求1所述的一种利用海洋硅藻共栖细菌发酵制备遗忘性贝毒软骨藻酸的方法，其特征在于，所述步骤4）中甲醇溶液的体积浓度为75-85%。