[发明专利]一种鸡传染性法氏囊病病毒的全悬浮培养方法

说明书

本发明公开了一种鸡传染性法氏囊病病毒的全悬浮培养方法，包括以下步骤：步骤1：鸭胚细胞衍生的传代细胞系的复苏与传代培养。步骤2：采用二阶培养法，向全悬浮培养的鸭胚细胞衍生的传代细胞系接种鸡传染性法氏囊病病毒，实现病毒大规模培养。步骤3：接毒后，每隔12h取样测定病毒的TCID₅₀，在病毒TCID₅₀达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的鸡传染性法氏囊病病毒。本发明的全悬浮培养方法提高了病毒培养规模和效率，符合未来疫苗生产的趋势，有广阔的应用前景及蕴含良好的经济效益。

技术领域

本发明涉及一种鸡传染性法氏囊病病毒的全悬浮培养方法，特别涉及一种用传代细胞系全悬浮培养鸡传染性法氏囊病病毒的方法，属于兽用生物制品技术领域。

背景技术

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是一种由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease Virus，IBDV)感染引起的鸡急性、高度接触性传染病，是我国规定要严格防控的II类动物疫病。IBDV主要侵害雏鸡体液免疫器官法氏囊，损伤淋巴细胞，从而导致鸡的免疫机能障碍，进而增加对其他病原的易感性，甚至造成对其他疫苗的免疫应答能力下降。感染IBDV后，雏鸡群在短时间内大量死亡或鸡群产肉、产蛋等生产性能大幅度下降，带来直接经济损失。由于IBDV超强毒株的出现及环境因素、免疫程序等诸多因素的影响，鸡IBD在我国发病情况呈现新趋势：流行面积日益扩大、发病鸡群日龄变宽、伴随严重继发感染和并发症等。鸡IBD疫情不容忽视，防控工作应有效开展。

除了严格的环境卫生制度外，疫苗的使用仍然是目前鸡IBD的主要防控手段，生产中应用最广泛的IBDV疫苗种类是灭活疫苗和弱毒疫苗。接种鸡胚后收获尿囊液是上述两类疫苗的传统生产方式，现也有使用鸡胚成纤维细胞(CEF)生产弱毒疫苗，但无论是使用鸡胚或是CEF，都存在SPF鸡胚消耗大、单位材料生产力低、生产周期长、总体生产成本高等天然问题。传统生产工艺的缺陷对IBDV疫苗的应用产生了一定的限制，不符合现阶段养禽业疫病防控、健康发展的需求，因此，迫切需要一种低成本、大规模、高效的IBDV疫苗生产方式适应行业的生产。

细胞悬浮培养技术是指细胞在生物反应器中自由悬浮于培养基内生长增殖的一种培养方法，细胞能达到较高密度，可用于多种产品生产。该方法是当前国际上生物制品生产的主流模式，最大优势是通过精确有效的工艺控制手段，在获得最大产量的同时能稳步提高产品的质量。随着我国畜牧产业集约化程度提高和养殖规模的扩大，兼具低成本、高质量的疫苗必然顺应时代的需求，利用细胞悬浮培养技术进行疫苗生产是我国兽用生物制品行业发展的必然趋势。使用MDCK细胞(犬肾细胞)全悬浮培养禽流感病毒、使用BHK-21细胞(乳仓鼠肾细胞)全悬浮培养口蹄疫病毒等均已在生产中得到验证，但关于IBDV的全悬浮培养方法国内未见报道，生产方式仍有很大的优化空间。鸭胚细胞衍生的传代细胞系可实现无血清全悬浮培养，比普通细胞悬浮培养技术更进一步实现产品质量可控。本发明选择使用鸭胚细胞衍生的传代细胞系，应用细胞全悬浮方式培养IBDV，在实现大规模生产的同时，保证了较高的病毒滴度，兼顾生产成本和产品质量，具有广阔的应用前景及蕴含良好的经济效益。

发明内容

本发明提供了一种鸡传染性法氏囊病病毒的全悬浮培养方法，鉴于传统IBDV培养方法存在局限性，本发明的目的在于提供用全悬浮鸭胚细胞衍生的传代细胞系培养鸡传染性法氏囊病病毒的方法，从而为实现鸡传染性法氏囊病病毒疫苗的大规模生产提供参考。

本发明提供了一种鸡传染性法氏囊病病毒的全悬浮培养方法，包括以下步骤：

步骤1：鸭胚细胞衍生的传代细胞的复苏与传代培养。

步骤2：采用二阶培养法，向全悬浮培养的鸭胚细胞衍生的传代细胞接种鸡传染性法氏囊病病毒，实现病毒大规模培养。