[发明专利]一种提取水培植物基因组DNA的试剂盒及提取方法

说明书

本发明属于DNA提取方法领域，具体涉及一种提取水培植物基因组DNA的试剂盒及提取方法。所述试剂盒包括样品缓冲液、DNA提取液、体积比24:1的氯仿：异戊醇混合液、异丙醇、体积分数70％～75％的乙醇溶液、ddH₂O、纤维素酶，所述样品缓冲液为100～150g/L的葡萄糖溶液。所述方法包括材料预处理、提取、除蛋白、沉淀、清洗、溶解等步骤。本发明的试剂盒和方法在DNA的提取过程中避免使用液氮，提高试剂的使用方便度，减少液氮冻伤操作者手部的风险，耗时短。

技术领域

本发明属于DNA提取方法领域，具体涉及一种提取水培植物基因组DNA的试剂盒及提取方法。

背景技术

DNA是动植物遗传物质，其在研究物种进化，生理功能方面具有重要作用。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法是传统且较为常见的植物DNA提取方法。CTAB法提取DNA的原理如下：利用CTAB在高离子强度的缓冲液中与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，但不沉淀核酸的特性，用离心获得含DNA的上清液，用氯仿和异戊醇混合液使蛋白质变性、分层，同时除去脂类的方法，达到提取和纯化DNA的目的。传统的CTAB方法虽然适用于大部分动植物以及微生物DNA的提取，但因其耗时长，所以现有技术针对不同的样品做了不同的改进。

以“改进的CTAB提取植物DNA方法，李荣华，实验室研究与探索，2009年”记载的方法为例，该文献记载的方案针对的是植物叶片样本DNA的提取，经过改进后，CTAB法提取DNA主要包括(1)液氮研磨样品步骤，耗时15min左右，(2)DNA提取液提取步骤，耗时45min左右，DNA提取液是CTAB、NaCl、EDTA、Tris-HCl、β-巯基乙醇、水的混合物，(3)除蛋白步骤，耗时20min左右，(4)异丙醇沉淀步骤，耗时1h以上，(5)乙醇溶液清洗、干燥步骤，耗时30min左右。该方法总计耗时2小时50分钟以上。上述改进的CTAB方法缩短了提取时间，可以使学生在较短的时间内直接观察到DNA的丝状沉淀，也可以在琼脂糖电泳中确定出提取的DNA分子的大小。

但是，由于上述方法采用的液氮研磨，液氮温度非常低，液氮的存储和使用均不太方便，且易冻伤操作者手部，因此，有必要进一步对CTAB方法进行改进，以期在缩短DNA提取时间的同时，避免使用液氮。

发明内容

本发明提供的一种提取水培植物基因组DNA的试剂盒及提取方法，缩短了DNA提取时间，为提高科研和教学效率奠定了基础。

本发明的第一个目的是提供一种提取水培植物基因组DNA的试剂盒，包括样品缓冲液、DNA提取液、体积比24:1的氯仿：异戊醇混合液、异丙醇、体积分数70％～75％的乙醇溶液、ddH₂O、纤维素酶；

所述样品缓冲液为100～150g/L的葡萄糖溶液；

所述DNA提取液的配方如下：CTAB 2g、NaCl 1.4mol、0.5mol/L pH8.0的EDTA溶液4mL、1mol/L pH8.0的Tris-HCl溶液10mL、β-巯基乙醇2.5mL，双蒸水定容至100mL。

优选的，所述的提取水培植物基因组DNA的试剂盒，所述样品缓冲液为100g/L的葡萄糖溶液或者150g/L的葡萄糖溶液。

本发明的第二个目的是提供一种利用所述的试剂盒提取水培植物基因组DNA的方法，包括以下步骤：

S1，样品预处理：将采集的水培植物组织与样品缓冲液混合，研磨5～10min，加入样品75mg/mL的纤维素酶溶液，置于37℃15min，得到破壁溶液；

S2，提取：向破壁溶液中加入1～2倍体积的DNA提取液，混匀，65℃水浴加热20～40min，离心，收集上清液；

S3，除蛋白：向上清液中加入等体积的体积比24:1的氯仿：异戊醇混合液，上下颠倒混匀3min，静置几秒，吸取上层溶液；