[发明专利]肿瘤特异性基因表达盒、重组表达载体及构建方法和应用

权利要求书

1.一种肿瘤特异性基因表达盒，其特征在于，包括依次连接的启动子、目的基因、接头、第一自杀基因、第二自杀基因和终止子；其中，所述目的基因为黑色素瘤分化相关基因7，所述接头为连接肽GS基因，所述第一自杀基因为单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因，所述第二自杀基因为胞嘧啶脱氨酶基因，所述启动子为CMV启动子，所述连接肽GS基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的肿瘤特异性基因表达盒，其特征在于，还包括位于所述第二自杀基因与所述终止子之间的标记基因。

3.根据权利要求2所述的肿瘤特异性基因表达盒，其特征在于，所述标记基因为3Flag标签蛋白基因序列和/或荧光蛋白基因序列。

4.根据权利要求1所述的肿瘤特异性基因表达盒，其特征在于，所述终止子为WPRE序列。

5.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求1~4中任一项所述的肿瘤特异性基因表达盒。

6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为质粒或病毒载体。

7.根据权利要求6所述的重组表达载体，其特征在于，所述病毒载体为慢病毒载体、腺相关病毒载体或腺病毒载体。

8.如权利要求1~4中任一项所述的肿瘤特异性基因表达盒或权利要求5~7中任一项所述的重组表达载体在制备用于治疗肿瘤的产品中的应用。

9.一种重组表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

提供具有启动子和终止子的表达载体，通过双酶切和连接分别将目的基因、接头、第一自杀基因和第二自杀基因插入所述表达载体，得到结构含有启动子-目的基因-接头-第一自杀基因-第二自杀基因-终止子的重组表达载体；其中，所述目的基因为黑色素瘤分化相关基因7，所述接头为连接肽GS基因，所述第一自杀基因为单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因，所述第二自杀基因为胞嘧啶脱氨酶基因，所述启动子为CMV启动子，所述连接肽GS基因的序列如SEQ ID NO.1所示。