[发明专利]肿瘤特异性基因表达盒、重组表达载体及构建方法和应用

说明书

本发明涉及一种肿瘤特异性基因表达盒、重组表达载体及构建方法和应用。包括依次连接的启动子、目的基因、接头、第一自杀基因、第二自杀基因和终止子；其中，所述目的基因为黑色素瘤分化相关基因7，所述接头为连接肽GS基因序列，所述第一自杀基因为单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因，所述第二自杀基因为胞嘧啶脱氨酶基因。本发明不仅联合了具有极强抗肿瘤能力的mda‑7及双自杀融合基因TK‑CD，增强了抗肿瘤活性，能有效识别肿瘤位点，而且通过连接肽GS基因序列将其连接，使得到的肿瘤特异性基因表达盒或含有该肿瘤特异性基因表达盒的重组表达载体具有很高的转录活性，能够高效地表达，为肿瘤的治疗提供了新的途径。

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗领域，特别是涉及一种肿瘤特异性基因表达盒、重组表达载体及构建方法和应用。

背景技术

近些年来的大量研究证实，肿瘤发生与发展的生物学基础是基因突变。因此，肿瘤的基因治疗已成为目前肿瘤学研究的热点。而在基因治疗中，肿瘤相关基因如何联合应用以克服各自的缺陷、增强抗肿瘤的效果，并在肿瘤细胞或肿瘤组织中的特异性高效表达，对基因治疗的效率和安全性有着重要的意义，也是目前基因治疗所遇到的挑战之一。

黑色素瘤分化相关基因7，即白介素24(melanoma differentiation-associatedgene-7/interleukin-24，mda-7/IL-24)是通过消减杂交发现的属于IL-10家族的抑制肿瘤细胞因子，能特异性的杀伤多种肿瘤细胞却不会损伤正常细胞。但是，mda-7与其它的基因联合应用时存在基因表达效率低下的问题，无法高效的表达从而发挥作用。

发明内容

基于此，有必要提供一种具有较高表达活性的肿瘤特异性基因表达盒及其构建方法和应用。

一种肿瘤特异性基因表达盒，包括依次连接的启动子、目的基因、接头、第一自杀基因、第二自杀基因和终止子；其中，所述目的基因为黑色素瘤分化相关基因7，所述接头为连接肽GS基因序列，所述第一自杀基因为单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因，所述第二自杀基因为胞嘧啶脱氨酶基因。

在其中一个实施例中，还包括位于所述第二自杀基因与所述终止子之间的标记基因。

在其中一个实施例中，所述标记基因为3Flag标签蛋白基因序列和/或荧光蛋白基因序列。

在其中一个实施例中，所述终止子为WPRE序列。

在其中一个实施例中，所述启动子为CMV启动子。

本发明还提供了一种重组表达载体，包含上述肿瘤特异性基因表达盒。

在其中一个实施例中，所述重组表达载体为质粒或病毒载体。

在其中一个实施例中，所述病毒载体为慢病毒载体、腺相关病毒载体或腺病毒载体。

本发明还提供了上述肿瘤特异性基因表达盒或上述重组表达载体在制备用于诊断或治疗肿瘤的产品中的应用。

本发明还提供了一种重组表达载体的制备方法，包括如下步骤：

提供具有启动子和终止子的表达载体，通过双酶切和连接分别将目的基因、接头、第一自杀基因和第二自杀基因插入所述表达载体，得到结构含有启动子-目的基因-接头-第一自杀基因-第二自杀基因-终止子的重组表达载体；其中，所述目的基因为黑色素瘤分化相关基因7，所述接头为连接肽GS基因序列，所述第一自杀基因为单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因，所述第二自杀基因为胞嘧啶脱氨酶基因。