[发明专利]一种检测外泌体的适配体组、侧流式适配体生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种侧流式适配体生物传感器，包括底板和粘附在所述底板上由下向上依次连接的结合垫、检测垫和吸收垫，所述检测垫包括检测线和质控线，其特征在于，所述结合垫喷涂有纳米金标记的CD63适配体偶合物，所述检测线喷涂有链霉亲和素-生物素标记的EpCam适配体偶合物，所述质控线喷涂有链霉亲和素-生物素标记的DNA探针，DNA探针的核苷酸序列与CD63适配体的核苷酸序列的3′端序列互补；

所述纳米金标记的CD63适配体偶合物中CD63适配体的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNo.1所示；

所述链霉亲和素-生物素标记的EpCam适配体偶合物中的EpCam适配体的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的侧流式适配体生物传感器，其特征在于，所述链霉亲和素-生物素标记的DNA探针中DNA探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示。

3.根据权利要求1或2所述的侧流式适配体生物传感器，其特征在于，所述纳米金标记的CD63的喷涂体积为3μl/cm结合垫。

4.根据权利要求1所述的侧流式适配体生物传感器，其特征在于，所述链霉亲和素-生物素标记的EpCam适配体偶合物的喷涂次数为3次，所述链霉亲和素-生物素标记的EpCam适配体偶合物的喷涂体积为3μl/cm检测垫。

5.权利要求1～4任意一项所述侧流式适配体生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在震荡条件下向纳米金溶液中依次加入dATP溶液、SDS溶液和NaCl溶液进行反应，

得到的反应液和CD63适配体混合，在60℃下反应3h，固液分离，将所得沉淀溶解于纳米粒子存储液中，得到纳米金标记的CD63适配体偶合物溶液喷涂在结合垫上，得到喷涂有纳米金标记的CD63适配体偶合物的结合垫；

所述纳米粒子存储液包括以下含量的组分：20mmol/L Na₃PO₄·12H₂O，质量浓度5％BSA，质量浓度0.25％ Tween20和质量浓度10％蔗糖；

(2)将生物素标记的EpCam适配体和链霉亲和素混合培养1h后，置于超滤离心管中超滤离心，对超滤离心管洗涤2次后，收集的上清液为链霉亲和素-生物素标记的EpCam适配体溶液；

(3)用DNA探针替换所述步骤(2)中的EpCam适配体，重复步骤(3)操作，得到链霉亲和素-生物素标记的DNA探针溶液；

(4)将所述步骤(2)中链霉亲和素-生物素标记的EpCam适配体溶液和步骤(3)链霉亲和素-生物素标记DNA探针溶液先后在检测垫上划线，得到喷涂有检测线和质控线的检测垫；

(5)将所述步骤(1)中的喷涂有纳米金标记的CD63适配体偶合物的结合垫、所述步骤(4)中的喷涂有检测线和质控线的检测垫和吸水纸分别裁剪后由下向上依次组装在底板上，切条，得到侧流式适配体生物传感器；

所述步骤(1)和(2)～(4)之间没有时间顺序的限制，同时步骤(2)和步骤(3)之间也没有时间顺序的限制。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中纳米金溶液、dATP溶液、SDS溶液和NaCl溶液的体积比为200:2:3:10；所述纳米金溶液的浓度为15～20nmol/L，所述dATP溶液的浓度为1mmol/L，所述SDS溶液的质量浓度为1％，所述NaCl溶液的浓度为0.2mol/L。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中固液分离的方式包括离心；所述离心的转速为6000rpm，所述离心的时间为20min，所述离心的温度为4℃。