[发明专利]一种检测外泌体的适配体组、侧流式适配体生物传感器及其制备方法

说明书

本发明提供一种检测外泌体的适配体组、侧流式适配体生物传感器及其制备方法，属于外泌体检测技术领域。检测外泌体的适配体组包括CD63适配体和EpCam适配体，CD63适配体能特异性与外泌体的CD63蛋白结合，EpCam适配体能特异性与外泌体的EPCAM蛋白结合，两种适配体组不易受pH、温度等环境因素影响稳定性好。本发明还提供侧流式适配体生物传感器，主要基于层析试纸条原理将CD63适配体喷涂于结合垫上，将EpCam适配体喷涂形成检测线上，质控线上喷涂有能与纳米金标记的适配体的DNA探针通过碱基互补配对结合。测流式适配体生物传感器可以检测到500000个外泌体，为癌症快速筛查和诊断提供了革新的工具。

技术领域

本发明属于外泌体检测技术领域，具体涉及一种检测外泌体的适配体组、侧流式适配体生物传感器及其制备方法。

背景技术

外泌体(exosome)是由多种活细胞分泌的囊泡小体，其中含有蛋白质和RNA等多种组分。这种机体内普遍存在的纳米级被膜结构能够参与细胞间的物质交换和信息交流，在多种生理和病理过程中发挥重要作用。外泌体在外周血、尿液、唾液、腹水、羊水等体液中具有很高的丰度，而不同组织来源的外泌体在组成和功能方面存在差异，同时这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。肿瘤来源或肿瘤相关的外泌体是调控肿瘤发生发展的重要机制，对肿瘤外泌体的分析和检测可以辅助肿瘤的早期诊断、疗效评价和预后分析。外泌体作为生物标志物虽然还处于起步阶段，但随着进一步的研究，外泌体的临床应用将会有良好的前景。

目前，应用电镜可以直接观察外泌体形态，应用Western blot法可以根据外泌体表面的标志物CD9、CD63等跨膜分子，利用CD9、CD63单克隆抗体与相应抗原结合，检测外泌体蛋白表达量。应用PCR或测序的方法对外泌体内含有的遗传信息物质进行分析是目前应用越来越广泛的检测方法，其他还有一些鉴定技术如动态光散射技术，流式细胞术分析，纳米微粒追踪分析、电化学、荧光、SPR、SPRI、颜色分析等。上方法或者需要昂贵的大型仪器，或者需要复杂的操作步骤，不利于广筛。检测外泌体的方法还包括酶联免疫分析、免疫印迹分析。虽然利用抗原抗体免疫分析能取得较高的检测灵敏度，也不需要大型仪器，但是筛选与外泌体表面标志蛋白特异性结合的抗体往往步骤复杂，同时抗体蛋白质易受pH、温度等环境因素影响而变性、且合成价格昂贵。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种合成更容易，稳定性好的检测外泌体的适配体以及适配体组，同时本发明提供还提供了一种检测灵敏度高、简便快捷、不需要复杂昂贵的仪器设备且价格低廉的侧流式适配体生物传感器及其制备方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种检测外泌体的CD63适配体，所述CD63适配体组的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

本发明提供了一种检测外泌体的适配体组，所述适配体组包括CD63适配体和EpCam适配体，所述EpCam适配体的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。

本发明提供了一种侧流式适配体生物传感器，包括底板和粘附在所述底板上由下向上依次连接的结合垫、检测垫和吸收垫，所述检测垫包括检测线和质控线，所述结合垫喷涂有纳米金标记的CD63适配体偶合物，所述检测线喷涂有链霉亲和素-生物素标记的EpCam适配体偶合物，所述质控线喷涂有链霉亲和素-生物素标记的DNA探针，DNA探针的核苷酸序列与CD63适配体的核苷酸序列的3′端序列互补；

所述纳米金标记的CD63适配体偶合物中CD63适配体为所述检测外泌体的CD63适配体；

优选的，所述链霉亲和素-生物素标记的DNA探针中DNA探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。

优选的，所述纳米金标记的CD63适配体偶合物的喷涂量为3μL/cm结合垫。