[发明专利]一种定性检测嗜热链球菌的引物及方法有效
| 申请号： | 201811179187.0 | 申请日： | 2018-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN109055590B | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 姚国强;其木格苏都;高鹏飞 | 申请（专利权）人： | 北京科拓恒通生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/46 |
| 代理公司： | 北京弘权知识产权代理有限公司 11363 | 代理人： | 逯长明;许伟群 |
| 地址： | 101407 北京市怀柔区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 定性 检测 链球菌 引物 方法 | ||
1.一种用于定性检测嗜热链球菌S10的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物包括上游引物S10F和下游引物S10R，或者为所述上游引物S10F/下游引物S10R的互补链序列，其中，上游引物S10F的序列为5’-ATGTTTGAACGAACTACCAAGAT-3’；下游引物S10R的序列为5’-TCACTAACTGTTCTCCCTGTCTC-3’，其中，所述嗜热链球菌S10的微生物保藏编号为CGMCCNo.16129。
2.权利要求1所述特异性引物在制备PCR定性检测嗜热链球菌S10的试剂盒中的应用。
3.一种用于PCR定性检测嗜热链球菌S10的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的特异性引物。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：标准品、特异性引物和PCR体系。
5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，其工作程序为95℃变性5min；95℃变性1min，58℃退火45s，72℃延伸1min，循环30次；最后72℃延伸7min。
6.权利要求1所述的特异性引物或者权利要求3所述的试剂盒在荧光PCR方法中用以定性检测嗜热链球菌S10的应用。
7.一种定性检测嗜热链球菌S10的方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤1，从待检测样品中提取该样品中所有细菌的DNA片段，作为进一步扩增的模板DNA；
步骤2，利用权利要求1所述特异性引物步骤1制得的模板DNA进行PCR扩增；
步骤3，对步骤2制得的PCR扩增产物进行凝胶电泳检测。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，
步骤1中利用CTAB法或者试剂盒法提取所有细菌的DNA，作为模板DNA；和/或
步骤2中，PCR扩增的条件为：95℃变性5min；95℃变性1min，58℃退火45s，72℃延伸1min，循环30次；最后72℃延伸7min，4℃保存；和/或
步骤3中，凝胶电泳的条件为：电压为5V/cm，电泳时间为20-30min，特征条带的位置约为298bp处。
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