[发明专利]非洲猪瘟病毒的检测试剂、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种非洲猪瘟病毒检测试剂，其特征在于包括：

引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示的上游引物、下游引物，所述上游引物的5’端标记有第一核酸标记物，所述下游引物的5’端标记有第二核酸标记物。

2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒检测试剂，其特征在于：所述第一核酸标记物和第二核酸标记物为半抗原或荧光素分子标记；优选的，所述的半抗原包括生物素或地高辛；所述荧光素包括罗丹明、异硫氰酸荧光素、Cy3、Cy5中的任意一种；优选的，所述第一核酸标记物和第二核酸标记物不同。

3.一种用于检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于包括权利要求1-2中任一项所述的非洲猪瘟病毒检测试剂。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括PCR扩增组件。

5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于还包括层析试纸条，所述层析试纸条包括吸水滤纸垫、结合物垫、侧向层析基质以及吸水垫，所述侧向层析基质上形成有检测带和质控带，所述检测带远离吸水垫设置，所述质控带设置于检测带和吸水垫之间，所述吸水滤纸垫、吸水垫分别设置在侧向层析基质的两端，所述结合物垫设置在吸水滤纸垫上，所述结合物垫上附有第一抗体，所述第一抗体为第一核酸标记物或第二核酸标记物的抗体与有色颗粒的复合物，所述检测带包含第二抗体，所述第二抗体为第二核酸标记物或第一核酸标记物的抗体或配体；所述质控带包含第三抗体，所述第三抗体为能够结合指定种属来源抗体的抗体。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述侧向层析基质结合在衬底上。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述的侧向层析基质包括硝酸纤维膜；和/或，所述的第三抗体为羊抗鼠多抗；和/或，所述的有色颗粒为胶体金颗粒。

8.一种检测非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于包括：

提供权利要求3-7中任一项所述的试剂盒，

提取非洲猪瘟病毒的DNA，并利用所述试剂盒中的引物对及PCR扩增组件进行PCR扩增获得扩增产物；

将所述扩增产物滴加在所述试剂盒中的层析试纸条的吸水滤纸垫上，并观察质控带、检测带；若在检测带上形成肉眼可见的有色线条，则判断为阳性；否则为阴性。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，扩增35个循环，最后72℃延伸7min。

10.一种产品，应用于非洲猪瘟病毒的检测方法，其特征在于，所述的产品包括权利要求3-7中任一项所述的试剂盒，并且所述的检测方法包括：

提取非洲猪瘟病毒的DNA，并利用所述试剂盒中的引物对及PCR扩增组件进行PCR扩增获得扩增产物，其中采用的PCR扩增反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，扩增35个循环，最后72℃延伸7min；

将所述扩增产物滴加在所述试剂盒中的层析试纸条的吸水滤纸垫上，并观察质控带、检测带；若在检测带上形成肉眼可见的有色线条，则判断为阳性；否则为阴性。