[发明专利]非洲猪瘟病毒的检测试剂、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒的检测试剂、试剂盒及其应用。所述非洲猪瘟病毒检测试剂包括：引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示的上游引物、下游引物，所述上游引物的5’端标记有第一核酸标记物、下游引物的5’端标记有第二核酸标记物。本发明提供的检测非洲猪瘟病毒的方法是以标记的特异性引物扩增适当长度的基因片段，能够保证检测的高度特异性，提高了检测结果的准确性；并且本发明提供的检测方法避免了扩增产物稀释和探针杂交等流程，保持了免疫胶体金试纸条技术直观、快速、方便、成熟、廉价等优点。

技术领域

本发明特别涉及一种非洲猪瘟病毒的检测试剂、试剂盒及其应用，属于分子生物学盒免疫学技术领域。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是猪的一种高度接触性传染疾病，病死率可达100％，由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起与传播。该病发作非常迅速，不到1个世纪的时间，从非洲开始席卷至近乎整个世界。鉴于该病的严重危害性，世界卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。目前，针对ASFV防控，尚无有效的商品化疫苗。2018年8月1日，国家外来动物疫病研究中心在沈阳市沈北区确诊我国首例ASF病例，之后又分别在河南郑州，江苏连云港，黑龙江省佳木斯市和安徽芜湖市、宣城市等地发生非洲猪瘟疫情，加强对对我国ASF的检疫及防控已刻不容缓。

ASF通常表现急性病程，病猪往往在出现明显临床症状前就死亡。典型症状主要表现出血热、心跳与呼吸频率加速、呕吐腹泻、眼睑分泌物、远端肢体与胸腹部发红、厌食、精神萎靡等。感染动物会出现多器官病理损伤，主要包括淋巴结、肾、膀胱、脾脏、内脏黏膜出现出血点。上述ASF临床症状和病理同古典猪瘟CSF、猪皮炎与肾病综合征PDNS、蓝耳病PPRS比较类似，通过临床诊断和病理诊断很容易混淆，因此需要快速、可靠、特异、敏感的检测技术辅助诊断。

目前为止，ASF尚无有效疫苗预防及治疗方法，短期内依靠早期诊断与区域化防控管理来进行防制。各国均采用严格的监测计划，一经发现采取大范围扑杀方式切断传染源。现有的检测方法存在操作复杂、易受环境影响、容易感染、不适于早期诊断且检测结果误差较大等缺点。因此，亟需一种快速、准确、便捷的诊断方法。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种非洲猪瘟病毒的检测试剂、试剂盒及其应用，以克服现有技术的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例一方面提供了一种非洲猪瘟病毒检测试剂，其于包括：

引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示的上游引物、下游引物，所述上游引物的5’端标记有第一核酸标记物，所述下游引物的5’端标记有第二核酸标记物。

进一步的，所述第一核酸标记物和第二核酸标记物为半抗原或荧光素分子标记。

优选的，所述的半抗原包括生物素或地高辛；所述荧光素包括罗丹明、异硫氰酸荧光素、Cy3、Cy5中的任意一种，但不限于此。

优选的，所述第一核酸标记物和第二核酸标记物不同。

本发明实施例一方面提供了一种用于检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其包括所述的非洲猪瘟病毒检测试剂。

进一步的，所述试剂盒还包括PCR扩增组件。