[发明专利]一种人参皂苷Rh2的制备方法

说明书

本发明公开了一种人参皂苷Rh2的制备方法，该方法以三七总皂苷生产制备过程中的废弃物为原料，经过大孔树脂柱富集除杂、萃取、分离、重结晶等过程，获得纯度大于98%的20(S)‑人参皂苷Rh2，本发明方法简单易操作，适用于工业化生产，达到废弃物资源充分利用的目的。

技术领域

本发明涉及一种人参皂苷Rh2的制备方法，属于植物活性成分制备领域。

背景技术

人参皂苷Rh2分子量为622.88，人参皂苷Rh2主要通过阻断生物反应体系中一些重要酶类的合成与代谢来发挥抗肿瘤作用；能抑制肿瘤细胞生长，阻断肿瘤细胞重要成分的合成与代谢；其中20(S)-人参皂苷Rh2抗癌活性高于20(R)-人参皂苷Rh2。

人参皂苷Rh2在新鲜三七中含量甚微，在三七的烤干或热回流提取过程会出现不同程度三七二醇皂苷降解为人参皂苷Rh2。

三七皂苷中二醇皂苷稳定性较三醇差，在热回流提取或长久放置过程中均容易出现降解，特别是在以甲醇或乙醇为溶剂的溶液中比在水中降解更快，加热更甚，目前中检所对人参皂苷RB1标准品已采用冰盒子冷冻保存发售。在传统提取三七总皂苷过程乙醇回流提取造成一定量二醇皂苷降解为人参皂苷CK、Rh2、RG3。人参皂苷CK具有水溶性，人参皂苷RH2具有醇溶性和微量水溶性，人参皂苷RG3基本无水溶性，在乙醇、甲醇中溶解度也非常低。人参皂苷CK由于具有水溶性，在三七总皂苷提取过程中主要存在于三七总皂苷最终产品中。人参皂苷Rh2，人参皂苷RG3水溶差，极性较小，在三七总皂苷生产过程中，Rh2、RG3在粗提液浓缩过滤过程中大部分沉淀出来，小部分Rh2溶解在粗提液中被大孔树脂柱吸附，在用70-80%的乙醇解析三七总皂苷过程中无法被解析下来，需高浓度有机溶剂比如95%乙醇、甲醇、丙酮才能解析下来。目前工业化制备三七总皂苷，在洗脱完总皂苷后树脂直接酸碱处理，人参皂苷Rh2、RG3均随之被洗脱丢弃，造成浪费。

发明内容

本发明目的在于提供一种人参皂苷Rh2的制备方法，本发明对提取三七总皂苷过程中的含人参皂苷Rh2废弃物进行收集，分离纯化制备20(S)-人参皂苷Rh2，中试试验发现在2吨剪口提取三七总皂苷过程中，可以富集纯化2公斤人参皂苷Rh2，实现产业化资源充分利用。

本发明方法步骤如下：

（1）以三七剪口为原料，粉碎到50-70目后采用质量浓度70-80%的甲醇溶液或乙醇溶液热回流提取2-3次，提取温度80-85℃，每次提取时间2-3h，过滤，合并提取液，减压浓缩回收有机溶剂，得浑浊液体，浑浊液体在2-3℃下静置24小时，过滤得三七粗提物水溶性部分和沉淀部分，沉淀部分按干燥品计算主含50%小极性黄酮成分和20%左右的人参皂苷Rh2；

（2）将步骤（1）三七粗提物水溶性部分经过苯乙烯非极性大孔吸附树脂柱吸附三七总皂苷，水洗树脂柱到无色，然后用体积浓度70-75%的乙醇溶液解析三七总皂苷，三七总皂苷洗脱完全后，用体积浓度95-100%乙醇洗柱子，洗脱人参皂苷Rh2，收集乙醇洗脱液，洗脱液按干燥品计主含10%左右的人参皂苷Rh2；

（3）将步骤（1）沉淀部分和步骤（2）中乙醇洗脱液合并浓缩真空干燥粉碎后加入其质量3-4倍的甲醇或乙醇搅拌加热溶解，过滤得澄清甲醇或乙醇溶液，向该溶液中加入等体积的纯水，形成混悬液，将混悬液过苯乙烯非极性大孔吸附树脂，用NaOH-乙醇溶液洗脱三七黄酮杂质，再用体积浓度95-100%乙醇溶液洗脱人参皂苷Rh2，收集乙醇洗脱液浓缩干燥，干燥品主含40%左右的人参皂苷Rh2，其它为脂溶性杂质；

（4）将步骤（3）干燥品用其质量3-4倍的甲醇、乙醇或丙酮搅拌溶解，然后加入溶液体积2-3倍的环己烷、庚烷或辛烷，放冷后置于0-3℃下静置分层，取醇或丙酮层，主含20(S)-人参皂苷Rh2和20(R)-人参皂苷Rh2；