[发明专利]牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒及其应用

权利要求书

1. 一种牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中重组gD蛋白是利用如氨基酸序列为SEQ ID No.1所列的截短型gD序列在大肠杆菌系统中表达获得的，其基因序列如SEQ ID No.2所列序列。

2. 根据权利要求1所述的牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，所述重组gD蛋白克隆表达的引物序列：上游引物序列为SEQ ID No.3序列，下游序列为SEQ IDNo.4序列。

3.根据权利要求1所述的牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒由重组gD抗原包被酶标板、阴性对照、阳性对照、辣根过氧化物酶标记的IBR特异性单克隆抗体、样本稀释液、洗涤液、底物液和终止液组成，其中：

所述重组gD抗原包被酶标板上包被的是重组牛传染性鼻气管炎gD蛋白；

所述阴性对照为进口胎牛血清，并经《NY/T 575-2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术》中所列方法确认为阴性；

所述阳性对照为标准牛传染性鼻气管炎抗体阳性牛血清；

所述辣根过氧化物酶标记的IBR特异性单克隆抗体是利用辣根过氧化物酶标记IBR特异性鼠单抗制备的，其中IBR特异性鼠单抗是利用重组gD蛋白免疫小鼠后筛选获得的，其针对牛传染性鼻气管炎病毒具有特异性反应；

所述的样本稀释液是pH7.2的0.02mol/L PBS；

所述的洗涤液是含有0.05%吐温-20的 0.01mol/L pH7.2的PBS；所述的底物液是从市场上采购的商品化单组份TMB显色底物液；

所述的终止液是2mol/L硫酸溶液。

4.根据权利要求1所述的牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测牛血清中的牛传染性鼻气管炎抗体。

5.根据权利要求1所述的牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，试剂盒检测过程包括如下步骤：

(1) 采集并分离血清样本；

(2) 使用样本稀释液按照1:40的比例稀释样本后备用，若不立即使用，1~4小时应置于4℃保存，大于等于4小时需置于-20℃保存；

(3)利用所述的牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒检测处理好的样本，并判定结果。