[发明专利]牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒及其应用

说明书

提供了一种牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒，所述检测试剂盒由重组gD抗原包被酶标板、阴性对照、阳性对照、辣根过氧化物酶标记的IBR特异性单克隆抗体、样本稀释液、洗涤液、底物液和终止液组成。利用该试剂盒，可在较短时间内检测出牛群是否感染牛传染性鼻气管炎，并制定相应的管理策略。针对当前动物疫病防控的复杂形势，具有非常广阔的市场前景，可在基层检测和政府监管中发挥重大作用。

技术领域

本发明属于动物疫病快速检测技术领域，涉及一种牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒及其应用。

背景技术

牛传染性鼻气管炎（infectious bovine rhinotracheitis，简称IBR）是由牛疱疹病毒1型（BHV—1）感染家养牛和野生牛引起的一种病毒性传染病，被世界动物卫生组织列为B类疾病，我国农业部列为二类动物疫病。该病广泛分布于世界各地，死亡率较低。许多感染牛呈亚临床症状经过，往往由于细菌继发感染导致更为严重的呼吸道疾病及混合感染，因此对于IBR的早期感染诊断检测非常重要。

农业部行业标准《NY/T 575-2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术》列出了3种IBR的检测方法：病毒分离鉴定、微量血清中和试验、酶联免疫检测方法，前两种方法操作繁琐复杂，耗时长，所需试剂及设备较多，在基层牧场很难展开；而酶联免疫法整体耗时接近4h，并且需要配制各种溶液及准备组分，对于基层兽医实验室而言，亦难以开展。

更进一步而言，标准中所描述的酶联免疫法为兔多克隆抗体间接酶联免疫法，采用病毒抗原包被酶标板，存在一定的散毒风险，实验废物如处理不当亦可能导致交叉污染。如果开发出方便快捷、无散毒风险、省时省力的牛传染性鼻气管炎检测试剂盒则能极大程度地改善当前IBR的检测现状。

发明内容

本发明的目的在于提供一种牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒，利用该检测试剂盒可在1小时内检测出牛群是否感牛传染性鼻气管炎病毒。

本发明提供的检测试剂盒无需昂贵设备，操作简便，无需特殊培训，检测灵敏度高，非常适合基层兽医实验室、养殖场检测应用。

本发明所提供的牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测试剂盒基于酶联免疫阻断法检测原理，由重组gD抗原包被酶标板、阴性对照、阳性对照、辣根过氧化物酶标记的IBR特异性单克隆抗体、样本稀释液、洗涤液、底物液和终止液组成。

其中，所述重组gD抗原包被酶标板上包被的是重组牛传染性鼻气管炎gD蛋白，所述重组gD蛋白是利用如SEQ ID No.1所列的截短型gD序列在大肠杆菌系统中表达获得的，表达该蛋白的基因序列如SEQ ID No.2所列。

所述阴性对照为进口胎牛血清，并经《NY/T 575-2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术》中所列方法确认为阴性。

所述阳性对照为标准牛传染性鼻气管炎抗体阳性牛血清。

所述辣根过氧化物酶标记的IBR特异性单克隆抗体是利用辣根过氧化物酶标记IBR特异性鼠单抗制备的，其中IBR特异性鼠单抗是利用重组gD蛋白免疫小鼠后筛选获得的，其针对牛传染性鼻气管炎病毒具有特异性反应。

所述的样本稀释液是pH7.2的0.02mol/L PBS。

所述的洗涤液是含有0.05%吐温-20的0.01mol/L PBS（pH7.2）。

所述的底物液是从市场上采购的商品化单组份TMB显色底物液。

所述的终止液是2mol/L硫酸溶液。

本发明的另外一个目的是提供上述检测试剂盒的制备方法，具体包括如下步骤：

（1）重组gD蛋白的制备；

（2）gD蛋白特异性单克隆抗体的制备；

（3）检测试剂盒各组分的制备；