[发明专利]基于分子信标的实时定量PCR检测布鲁氏菌感染的体系

说明书

本发明涉及生化检测领域，尤其是涉及一种基于分子信标的实时定量PCR检测布鲁氏菌感染的体系、试剂盒及检测方法。该检测体系、试剂盒和检测方法包括扩增引物系统和分子信标探针系统，所述扩增引物系统包括序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对，所述分子信标探针系统包括如SEQ ID NO.3所示的基因序列。与细菌培养、SAT和RBPT等血清学试验相比，能够提高检测效率，并且特异性好、灵敏度高，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生化检测领域，尤其是涉及一种基于分子信标的实时定量PCR检测布鲁氏菌感染的体系、试剂盒及检测方法。

背景技术

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病，导致动物的繁殖障碍和人类的发热性疾病，并且在中东、西亚、非洲和南美等地区流行。在过去的几十年中，中国特别是新疆和内蒙古的人类布鲁氏菌病患病率显着增加。基于使用一系列细菌学和生物化学测试的单一表型特征，布鲁氏菌通常分为六种。近年来，由于从海洋哺乳动物、啮齿动物和感染的人类乳房植入物中分离出几种新的布鲁氏菌菌株，物种数量已增加到10。

人体中的布鲁氏菌病具有多种临床症状，其中最重要的是断续不稳定的发热和动脉痛。大部分患者伴有脾肿大和/或肝肿大。当疾病变为慢性时，它会影响几乎所有器官并导致复杂的综合征，包括脊椎炎、心内膜炎和脑膜脑炎等。

一般来说，布鲁氏菌病的诊断方法包括直接微生物分析和间接检测，如血清学检测。细菌培养是疾病决定性诊断的重要标准，但需要较长时间，灵敏度较低。血清学检测方法如标准凝集试验（SAT）和板式孟加拉红平板凝集实验（RBPT）均为用于检测抗布鲁氏菌抗体，但血清学方法可能被疫苗，反复暴露于抗原刺激，或与布鲁氏菌以外的抗原交叉反应等问题混淆，影响检测的准确性。

与细菌培养方法相比，分子测定法是度敏度高的，并且与血清学方法相比更具特异性。PCR方法具有可信度高，成本效益高，灵敏度高，特异高并且检测快速，越来越多地被用作鉴定布鲁氏菌属、种和生物型的特定序列，以及利用它作为减少布鲁氏菌病爆发的监测工具。

分子信标（MB）是标记的单链寡核苷酸，具有茎 - 环结构。环是与其靶序列互补的单菌株，而茎是由5至7bp的两个抗互补臂形成的双菌株以稳定环。一条臂的末端用荧光团标记，另一条臂的末端用淬灭基团连接。环与其靶序列的结合打开了茎并从荧光团中除去了淬灭基团，产生了荧光。MB生成信号仅在目标存在的情况下产生。为了克服检测时产生的误导，需要一种诊断布鲁氏菌感染的新方法。 在本研究中，建立并评估了基于分子信标的实时定量PCR方法。通过与细菌培养和血清学试验比较来评估了其诊断价值。

发明内容

基于此，本发明提供一种基于分子信标的实时定量PCR检测布鲁氏菌感染的体系、试剂盒及检测方法，能够提高检测效率，并且特异性好、灵敏度高。

一种基于分子信标的实时定量PCR检测布鲁氏菌感染的体系，其特征在于，包括扩增引物系统和分子信标探针系统，其中，所述扩增引物系统包括序列如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示的引物对。

在一些实施例中，所述分子信标探针系统包括如SEQ ID NO.3所示的基因序列。