[发明专利]一种布鲁氏菌生物恐怖战剂现场基因检测方法

说明书

本发明公开一种布鲁氏菌生物恐怖战剂现场基因检测方法，其包括步骤：S1、采集袭击现场样本并处理；S2、对处理后样本利用布鲁氏菌现场检测试剂盒进行实时荧光定量PCR检验，其中，试剂盒中包括阴性对照、阳性对照和布鲁氏菌属特异性上下游引物，将处理后样本、阴性对照及阳性对照分别作为底物在相同条件下进行同样的实时荧光定量PCR处理，对待测样品的检测结果进行分析，从而判断处理后样本是否带有布鲁氏菌。本发明建立的布鲁氏菌现场基因检测方法可直接使用样本作为PCR检测底物，适用于快速从各种相态的环境样本中筛选存在布鲁氏菌基因组DNA的样品。为消防部队在生物恐怖袭击现场的生物性危害快速识别提供了解决办法。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种布鲁氏菌生物恐怖战剂现场基因检测方法。

背景技术

布鲁氏菌可以感染人和牲畜造成布鲁氏菌病，在我国布鲁氏菌病属于乙类传染病，世界卫生组织将其定位B类传染病，传染性强，对人类伤害大，由于布病反复发转为慢性后，会留下后遗症导致终身残疾，且会传染给下一代，至今全世界有170余个国家和地区报告过疫情。我国虽然强制干预，布病疫情依然以目前两位数的百分比速率增长，对我国经济建设，人民健康，国家安全带来了严重威胁。

随着我国消防队应急管理职能的不断拓展，消防部队经常参与各类大型活动的安保以及国家反恐、处突的行动中。而生物恐怖由来已久，给全世界人民带来了巨大伤害，反生物武器、反生物恐怖是国家安全的重要组成部分。

但是，在我国国内尚没有针对消防部队等处置生物恐怖事件所建立的生物侦检方法，现在所使用的仪器和材料需要全部从国外进口，不仅操作复杂操作难度大，检测费用高昂。

因此，现有技术有待于进一步发展。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供了一种布鲁氏菌生物恐怖战剂现场基因检测方法，以实现对布鲁氏菌生物恐怖战剂简便、高效、灵敏、快速、稳定的检测，其技术方案如下。

一种布鲁氏菌生物恐怖战剂现场基因检测方法，其中，包括以下步骤：

S1、采集袭击现场的样本并进行处理；

S2、对处理后样本利用布鲁氏菌现场检测试剂盒进行实时荧光定量PCR检验，其中，布鲁氏菌现场检测试剂盒中包括阴性对照、阳性对照和布鲁氏菌属特异性上下游引物，将处理后样本、阴性对照及阳性对照分别作为底物在相同条件下进行同样的实时荧光定量PCR处理，对待测样品的检测结果进行分析，从而判断处理后样本是否带有布鲁氏菌。

所述的布鲁氏菌生物恐怖战剂现场基因检测方法，其中，袭击现场采集的样本为擦拭样本、土壤样本或水样本；

当袭击现场采集的样本为擦拭样本时，样本处理步骤为：

1)将带有擦拭样本的药棉棒头插入吸附柱，用移液枪向每个有棉棒的吸附柱中加入200μL的磷酸缓冲液，关闭收集管；

2)将收集管离心，8000rpm，离心3min后关闭收集管；

3)将收集管调温振荡，温度65℃，600rpm，震荡10min；

4)将收集管调温振荡，设置温度15℃，1400rpm后冷却至40℃以下用于检测；

当袭击现场采集的样本为土壤样本时，样本处理步骤为：

1)打开采样瓶，用勺子取大约1g土壤样本于离心管中；

2)使用移液枪吸取1mL超纯水到离心管中，将离心管离心，3000rpm离心5min，吸取上清液到新的离心管中；

3)再次离心，10000rpm离心30s吸取下层液体用于检测；

当袭击现场采集的样本为水样本时，样本处理步骤为：