[发明专利]脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法

权利要求书

1.脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将脐带组织块在含有庆大霉素的生理盐水中清洗至鲜红色，剪成肉泥状组织；

(2)将肉泥状组织平铺于T75细胞培养瓶中；

(3)将细胞培养瓶倒扣，加入无血清培养基，放入培养箱中放置一段时间，之后将培养瓶正置，静置培养；

(4)七天后对培养瓶进行半量换液；

(5)待细胞汇合度达到80％时，进行传代培养；

(6)弃去上层溶液，收集细胞，加入传代培养基进行传代培养；

(7)传代到P3-P4代时用预诱导液抑制其增殖，待其达到90％汇合时，用体积浓度为0.25％的胰酶消化细胞，把一瓶细胞接种于2-3瓶T75低粘附性的培养瓶中；

(8)每个培养瓶中加入诱导液，将间充质干细胞定向诱导形成皮肤成纤维细胞；

(9)间充质干细胞在9-12天诱导形成皮肤成纤维细胞。

2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述生理盐水每500ml中含2支庆大霉素。

3.根据权利要求2所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法，其特征在于，所述庆大霉素每支8万单位。

4.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，培养箱的温度为37℃。

5.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述无血清培养基为人间充质干细胞基础培养基及间充质干细胞生长因子，两者以10:1混合，混合后加入L-谷氨酰胺，使其终浓度达到2mM。

6.根据权利要求5所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法的制备方法，其特征在于，所述人间充质干细胞基础培养基为达科为生物技术有限公司生产，产品编号10151A。

7.根据权利要求5所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞生长因子为达科为生物技术有限公司生产，产品编号10151B。

8.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，放置时间为2h，培养箱内二氧化碳浓度为5％。

9.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，所述传代培养基为MSCGM-CD^TMBulletKit＝3:1。

10.根据权利要求4所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法的制备方法，其特征在于，步骤(8)中，所述诱导液为IMDM培养液，其中CTGF含量为100ng/mL,维生素C含量为50g/mL。