[发明专利]一种血液添加剂

权利要求书

1.一种血液添加剂，其特征在于：包括：

抗凝剂6.0-8.8g/100ml，包括乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾、乙二胺四乙酸二钠、枸橼酸钠中的至少一种；

核酸酶抑制剂2.0-8.4g/100ml，包括BAPTA-AM、Tris(2-羧乙基)-膦-盐酸盐、氧钒核糖核苷复合物、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、焦炭酸二乙酯、硫酸铵、尿素中的至少一种；

细胞稳定剂4-20g/100ml，包括聚乙二醇、聚乙烯醇、侧金盏糖醇、松三糖、吐温-80、半胱氨酸、还原型谷胱甘肽中的至少一种；

嘌呤0-0.31g/100ml，包括腺嘌呤、鸟嘌呤的至少一种；

代谢抑制剂2-10g/100ml，包括甘油醛-3-磷酸、1,3-二磷酸甘油酸、甘油醛、氟化钠、磷酸烯醇式丙酮酸中的至少一种；

凋亡抑制剂0.021-0.21g/100ml，包括Q-VD-OPh、Z-VAD-FMK中的至少一种；

核酸保护剂0.1-1g，包括甜菜碱、海藻糖、甘氨酸、精氨酸、精胺、亚精胺中的至少一种；

非Cl-缓冲液90-110mM，pH 7.3-7.5，包括柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、MOPS缓冲液中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的一种血液添加剂，其特征在于：嘌呤浓度为0.11-0.31g/100ml。

3.根据权利要求1所述的一种血液添加剂，其特征在于：嘌呤为腺嘌呤。

4.根据权利要求1所述的一种血液添加剂，其特征在于：抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾；核酸酶抑制剂为尿素；细胞稳定剂为聚乙烯醇1788；代谢抑制剂为甘油醛。

5.根据权利要求1所述的一种血液添加剂，其特征在于：凋亡抑制剂为Q-VD-OPh；核酸保护剂为甘氨酸或精胺。

6.根据权利要求1所述的一种血液添加剂，其特征在于：非Cl^-缓冲液为MOPS缓冲液或磷酸盐缓冲液。

7.如权利要求1至6任一项所述的血液添加剂的使用方法，为将该血液添加剂按照与血液样本的体积比为1:30-40的比例添加到血液样本中。

8.用于评价血液添加剂保护效果的方法，包括如下步骤：

1)首先，对拥有某个特定基因突变的肿瘤细胞系进行常规细胞培养2-3天后，吸取培养液上清，离心使培养液上清仅含目标细胞分泌出的游离核酸，不含细胞，转移上清至新的离心管中；

2)使用含待评价血液添加剂的采血管和对照EDTA采血管分别采集健康志愿者的外周血，加入同等体积的上述培养液上清，之后进行常温运输测试和常温保存测试；

3)分别提取游离核酸，使用qPCR方法检测，以评价添加剂的效果，通过向健康人血液中引入突变基因，突变Ct值的变化主要用于指示核酸降解，而内控Ct值变化用于指示核酸降解和白细胞破裂，两者结合即可区分这两种效应，从而得到添加剂保护效果的评估结果。

9.如权利要求8所述的用于评价血液添加剂保护效果的方法，其特征在于，待评价血液添加剂为权利要求1至6任一项所述的血液添加剂。

10.如权利要求8所述的用于评价血液添加剂保护效果的方法，其特征在于，在不低于检测限1％时，突变Ct的变化指示核酸降解，核酸降解会导致突变Ct值升高，降解幅度为

内控Ct值变化用于指示核酸降解和白细胞破裂，核酸降解导致Ct值升高，白细胞破裂导致Ct值降低，白细胞破裂程度为