[发明专利]一种血液添加剂

说明书

本发明公开了一种血液添加剂，它包括抗凝剂6.0‑8.8g/100ml；核酸酶抑制剂2.0‑8.4g/100ml；细胞稳定剂4‑20g/100ml；嘌呤0‑0.31g/100ml；代谢抑制剂2‑10g/100ml；凋亡抑制剂0.021‑0.21g/100ml；核酸保护剂0.1‑1g。非Cl^‑缓冲液90‑110mM，pH 7.3‑7.5。本发明可常温保存血液14天，不影响检测。

技术领域

本发明涉及一种血液添加剂。

背景技术

2015年，液体活检技术被评选为年度十大突破技术之一，血液中因含有肿瘤来源的游离核酸而成为液体活检技术最重要的研究对象。有效实现基于血液的液体活检依赖于两个关键因素，一是需要足够灵敏的检测技术，因为血浆游离DNA(cell-free DNA，cfDNA)中，循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA)所占比例很低，随着检测技术的发展，目前ctDNA检测灵敏度已可达0.2％。第二，由于在现实世界中，血液采集后无法在第一时间分离血浆并进行ctDNA的提取和检测，因此，血液的有效保存也至关重要。然而，由于血液中含有丰富的核酸酶，极易降解ctDNA，同时血液中含有的大量白细胞在保存或运输过程中容易发生破裂，由此释放出的基因组DNA(gDNA)将进一步稀释原本已十分稀少的ctDNA，对检测构成严峻的挑战。此外，血液在保存或运输过程中，红细胞也容易破裂发生溶血，释放出的各种物质(如血红蛋白)也会干扰后续ctDNA的检测。

目前，对血液游离核酸的保护策略和方法有很多，但遗憾的是这些保护要么只是保护游离核酸，要么只是保护白细胞不破裂，要么保护剂中含有对人体或环境有害的成分，总之，现阶段尚缺乏一种能全面、系统的保护游离核酸、减少gDNA释放的方法。

申请号为201410534999.8的专利公开了一种稳定血液样品细胞的试剂，能防止血小板聚集并稳定血细胞至少36小时，但该专利并未涉及游离核酸保护的信息。

申请号为201611214323.6的专利公开了一种保护和稳定游离DNA的采血管，其保护剂组分中包含咪唑烷基脲，申请号为201610778832.5的专利公开了一种孕妇外周血中胎儿游离DNA的保存剂及其构成的真空采血管，保存剂中含有重氮咪唑烷基脲和/或甲醛，申请号为201510132774.4的专利公开了一种用于保护游离DNA的血液抗凝剂，该抗凝剂含有甲醛释放剂，包括1,3-二羟甲基-5,5-二甲基海因，羟甲基甘氨酸钠，尼泊金甲酯钠，尼泊金乙酯钠或尼泊金丙酯钠中的至少一种，申请号为201510088419.1的专利公开了一种可以在常温条件下采集和保存血样的循环游离DNA真空采集管，其中的添加剂含有防腐剂，包括2-溴-2-硝基丙烷-1，3-二醇、双咪唑烷基脲、季铵盐、酒精、羟甲基甘氨酸钠、乙内酰脲、甲醛及其衍生物、咪唑烷基脲、二羟甲基脲、恶唑烷或甲醇的一种或几种，申请公开号为US2014/0080112A1的专利公开了一种采血管，其添加剂含有防腐剂，选自咪唑烷基脲和双咪唑烷基脲。

以上专利用于解决游离核酸保护的策略和方法之一均是采用甲醛或甲醛释放剂，虽可起到一定的保护游离核酸和稳定细胞的作用，但会导致核酸、蛋白等物质交联，严重影响下游核酸的提取和检测。

申请号为201710380209.9的专利采用天然防腐剂(ε-聚赖氨酸、茶多酚、纳他霉素中的一种)代替化学防腐剂，解决了毒性的问题，但另一方面，多个研究(Chen XL and YinSM,Chin J Pathophysiol,2004；Taylor KA et al.,J Platlets,2017)表明Cl-离子可引起血小板活化和聚集。而该专利仍沿用含有Cl-离子的缓冲系统，不利于血小板的稳定，推测进一步可能不利于红细胞的稳定。其他使用Cl-离子缓冲系统的专利还包括申请号或授权号为201510062267.8、201610778832.5、201510132774.4、201580042850.0和US9376709等。