[发明专利]一种以磁性Fe3

权利要求书

1.一种以磁性Fe₃O₄-多糖微球为载体固定化果糖基转移酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）果糖基转移酶制备：将黑曲霉发酵20-48 h，抽滤收集湿菌体；用0.1-0.5 mol/L、pH5.0-7.0的柠檬酸-磷酸缓冲液清洗，所得菌体用上述缓冲液制成菌体悬浮液；破碎菌体，冷冻离心后取上清液；上清液浓缩后制得粗酶液；

（2）磁性Fe₃O₄-多糖微球的制备：配制1-50 mg/mL的多糖溶液90-100 mL，加入摩尔比为1:2的FeCl₂和FeCl₃，在室温下剧烈搅拌，调节pH至9-11，反应0.5-2 h后，溶液在40-80℃加热20-40 min，过滤，洗涤，冷冻真空干燥，得到磁性Fe₃O₄-多糖微球；所述多糖为菊粉或果聚糖；

（3）磁性Fe₃O₄-多糖微球固定化果糖基转移酶：取磁性Fe₃O₄-多糖微球加入pH 5.0-7.0的柠檬酸-磷酸缓冲液中充分浸泡溶胀，4-5 h后进行磁分离；加入果糖基转移酶酶液固定；0-5℃静置10-14h；通过磁场进行分离，用缓冲液反复洗涤沉淀，直至洗涤液中检测不到酶活力，即得到固定化酶。

2.根据权利要求1所述的方法，所述磁性Fe₃O₄-多糖微球中多糖与铁离子的质量比为1:5-1:10。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，磁性Fe₃O₄-多糖微球添加量为0.5 g；果糖基转移酶的添加量为100-400 U/g磁性Fe₃O₄-多糖微球。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，固定条件为：在pH 5.0-7.0、20-25 ℃的条件下，以100-200 rpm的转速在恒温摇床中振荡。

5.一种磁性Fe₃O₄-多糖微球，其特征在于，所述磁性Fe₃O₄-多糖微球按照如下方法制备：配制1-50 mg/mL的多糖溶液90-100 mL，所述多糖为菊粉或果聚糖；向多糖溶液中加入摩尔比为1:2的FeCl₂和FeCl₃，在室温下剧烈搅拌，调节pH至9-11，反应0.5-2 h后，溶液在40-80℃加热20-40 min，过滤，洗涤，冷冻真空干燥，得到磁性Fe₃O₄-多糖微球。

6.权利要求5所述的磁性Fe₃O₄-多糖微球在固定化果糖基转移酶中的应用。