[发明专利]用于检测无细胞的病原体特异性核酸的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测来源于受试者中病原体的靶核酸的方法，包括

(a)扩增靶核酸序列，其中所述靶核酸来源于受试者血液样本的无细胞组分，并且产生双链DNA，并且

(b)检测所述双链DNA，其中所述双链DNA的存在指示所述靶核酸在受试者中存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是DNA。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是RNA。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述无细胞组分是血清。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述无细胞组分是血浆。

6.根据权利要求1的方法，其中所述病原体是结核分枝杆菌(TB)。

7.根据权利要求1的方法，其中所述核酸序列来源于结核分枝杆菌(TB)H37Rv的DNA序列，所述DNA序列选自以下组：IS6110，IS1084，MPT 64，rrs，esat6，类esat6，MDR，rpoB，katG,iniB和它们的片段。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述双链DNA具有40-60个碱基。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述血液样本的体积为0.2-10毫升。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸序列由聚合酶链式反应(PCR)扩增。

11.根据权利要求1的方法，其中双链DNA是由检测试剂检测，所述检测试剂选自以下组：荧光标记探针，嵌入性荧光染料和延伸发光(LUX)引物。

12.根据权利要求11的方法，其中嵌入荧光染料选自以下组：SYBR绿，CytoGreen，EvaGreen，BOXTO和SYT09。

13.根据权利要求1所述的方法，还包括浓缩在无细胞组分中的所述靶核酸。

14.根据权利要求1所述的方法，还包括从血液样本中制备所述无细胞组分。

15.根据权利要求1所述的方法，还包括在所述受试者中诊断结核感染。

16.根据权利要求15的方法，其中所述结核病感染是活动性的。

17.根据权利要求15的方法，其中所述结核病感染是潜伏性的。

18.一种用于检测来源于受试者中病原体的靶核酸的试剂盒，包含

(a)一种或多种用于扩增所述靶核酸序列以产生双链DNA的试剂或材料，其中所述靶核酸来源于受试者血液样本的无细胞组分，和

(b)一种或多种用于检测所述双链DNA的试剂或材料。

19.根据权利要求18的试剂盒，其中所述一种或多种用于扩增靶核酸序列的试剂或材料包括一对引物，其中所述双链DNA具有40-60个核苷酸。

20.根据权利要求18的试剂盒，其中所述病原体是结核分枝杆菌(TB)。

21.根据权利要求18的试剂盒，其中所述核酸序列来源于结核分枝杆菌(TB)H37Rv的DNA序列，所述DNA序列选自IS6110，IS1084，MPT 64，rrs，esat6，类esat6，MDR，rpoB，katG,iniB和它们的片段。

22.根据权利要求18的试剂盒，其中所述一种或多种用于检测所述双链DNA的试剂或材料包括一种嵌入荧光染料。