[发明专利]一种制备特立帕肽的新工艺

说明书

本发明提供一种特立帕肽合成方法。本发明的所述的方法中，按照特立帕肽主链肽序分为片段[1‑12]肽树脂及片段一和片段二两个片段，可以分别先合成这三个短肽，再将片段[1‑12]肽树脂与片段一、片段二逐个连接，脱末端Fmoc保护基后得到特立帕肽树脂，最后经裂解、纯化、成盐最终获得目标产品。各片段及片段树脂的结构如说明书所述。本发明方法操作简单，所得产品纯度较高，成本较低，有利于工业化生产。

技术领域

本发明涉及多肽的合成技术，特别是利用固相合成技术实现特立帕肽的合成工艺。

背景技术

特立帕肽Forteo(Teriparatide)为美国礼来研发，用于原发性骨质疏松及性腺功能减退性骨质疏松、绝经后骨质疏松。是美国食品及药物管理局(FDA)首次批准的促骨形成新药，这种甲状旁腺激素的衍生物可以通过增加成骨细胞的活性及数量而促进骨生长，而目前的常规骨质疏松药物一般只是作用于破骨细胞而减缓或阻断骨质流失。原研的特立帕肽于2002年12月首次获批在美国上市，2011年3 月在中国获批上市。在一项涉及到1，637例绝经后骨质疏松症患者的临床研究结果显示，与那些只服用了钙和维生素D补加剂的患者相比，96％的患者在接受该药治疗后，其脊柱和臀部的骨(矿物质)密度BMD均表现出显著增加。此外还发现，该药能够分别减少发生脊椎骨折和其他类型骨折危险的65％和53％。该药的另一个特点是副作用很小，通常只是恶心、眩晕和腿痛性痉挛。特立帕肽在 2016年全球销售额达到15亿美元。我国是全世界骨质疏松人数最多的国家，有数据显示目前我国骨质疏松患者为9000万人，预计到2025年该数字将上升到 1.5亿，市场潜力巨大。

特立帕肽的结构式：

Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu- Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH

特立帕肽[hPTH(1-34)]是一种合成的多肽激素，为人甲状旁腺素PTH的1-34氨基酸片段，该片段是含有84个氨基酸的内源性甲状旁腺素PTH具有生物活性的 N-末端区域。特立帕肽的免疫学和生物学特性与内源性甲状旁腺素PTH以及牛甲状旁腺素PTH(bPTH)完全相同，能够刺激骨形成和骨吸收，减少绝经后妇女骨折的发生率，根据给药方式的不同，还能提高或降低骨密度。连续输注可导致甲状旁腺素PTH浓度持续增高，因此比仅引起血清甲状旁腺素PTH浓度短暂增高的每日注射法产生的骨吸收作用更强。此外，特立帕肽不抑制二磷酸腺苷诱导途径或者胶原诱导途径的血小板聚集反应。其用法为静脉注射或皮下注射，特别地，老年人剂量在31～85岁范围内，年龄增加对本药药动学无显著影响，无需调整剂量。

目前特立帕肽合成有关的专利如下：

1)采用逐级固相合成法。CN107501408及CN104530218等专利按照氨基酸序列，将氨基酸与树脂逐个连接的方法得到肽树脂，然后酸解获得特立帕肽粗品，特立帕肽粗品经纯化、转醋酸盐得到醋酸特立帕肽纯品；CN104017064按照从C端到N端的顺序将17与18位的Ser与Met偶联成二肽再对接到主链中； CN1103467595按照从C端到N端的顺序将18与19位的Asn与Ser偶联成二肽再对接到主链中。总体上CN104017064与CN1103467595还是采用了逐级连接的方法。总体而言，逐级固相合成法的技术方法差异主要体现在树脂、缩合或活化试剂、裂解溶剂等不同，相互之间的优势不显著。

2)片段固相合成法。CN105384809及CN102731643等专利将氨基酸序列分成多个片段合成，然后拼接得到最后的肽树脂，收率20～40％。缺点是碎片还是较多、步骤长、收率低，有待改善提升。