[发明专利]一种嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型的建立和检测方法

说明书

本发明公开了一种嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型的建立和检测方法。该方法包括如下步骤：(1)将小鼠通过OVA致敏以及激发，建立嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型；(2)将步骤(1)中获得的小鼠置于Buxco无创肺功能检测系统的密闭体描舱内自由活动；其中，Buxco无创肺功能检测系统连接有雾化控制器和信号转换器；(3)使用乙酰甲胆碱雾化激发小鼠，并通过Finepointe软件的气道反应性模式测定小鼠雾化激发前后Penh值的变化来评价小鼠的气道反应性。本发明建立了咳嗽明显、无气道高反应、气道嗜酸性粒细胞炎症、激素治疗有效且符合伦理的小鼠EB模型，有利于小鼠EB模型的推广和应用。

技术领域

本发明属于医学研究领域，特别涉及一种嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型的建立和检测方法。

背景技术

目前嗜酸粒细胞性支气管炎(EB)研究大多集中于临床，但鉴于人体研究的局限性，有关EB的探索在很大程度上需要通过动物实验进行，而目前EB动物模型暂缺，因此成功建立EB动物模型具有重要意义。目前国际上尚未建立确切的EB动物模型，仅有日本学者Ogawa提出了多粘菌素B滴鼻造模建立EB豚鼠模型的方法，但由于各种限制(如造模方法不符合人类EB的流行病学情况、饲养成本高、生物制剂少等)，未见其他学者采用该模型进行EB的研究。

小鼠与人类共享99％基因，且相关检测试剂多样且基因操作成熟，饲养及药物消耗成本较低，适宜大批量实验并进行深入研究。我们前期研究通过小剂量(10μg)鸡卵蛋白(OVA)滴鼻激发，成功复制了无气道高反应(AHR)及气道嗜酸性粒细胞炎症的小鼠EB模型(有创气道反应性测量)，但是该模型存在以下不足：①咳嗽是EB的重要临床特征，部分哮喘病人也表现为咳嗽，但该研究对小鼠咳嗽方面没能进行研究；②未观察激素对于咳嗽的治疗效果；③该种方法(即有创气道反应性测量)检测完毕后小鼠会立即死亡，不符合伦理要求，也无法批量制作合格的模型，费时费力，同时也无法将该模型应用于药物安全学等要求动物必须存活的实验中，导致目前该模型的应用较为局限，难以推广。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型的建立和检测方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种嗜酸粒细胞性支气管炎(EB)小鼠模型的建立和检测方法，包括如下步骤：

(1)将小鼠通过鸡卵蛋白(Ovalbumin，OVA)致敏以及激发，建立EB(嗜酸粒细胞性支气管炎)小鼠模型；

(2)将步骤(1)中获得的小鼠置于Buxco无创肺功能检测系统的密闭体描舱内自由活动，其中，Buxco无创肺功能检测系统连接有雾化控制器和信号转换器；

(3)使用乙酰甲胆碱(Mch)雾化激发小鼠，并通过Finepointe软件的气道反应性模式测定小鼠雾化激发前后Penh值(气道阻力预测值)的变化来评价小鼠的气道反应性。

步骤(1)中所述的小鼠为Balb/c小鼠；优选为雌性Balb/c小鼠，其年龄为7～8周龄，体重为18～20g，动物级别为SPF级。

所述的Balb/c小鼠的年龄优选为7周龄。

步骤(1)中所述的致敏优选为通过如下步骤实现：小鼠在第0天(当天)、第7天和第14天腹腔注射含有10μg OVA和1.3mg佐剂氢氧化铝的OVA溶液使小鼠致敏。

所述的OVA溶液优选为通过如下方法配制得到：

(I)将OVA粉末溶解到生理盐水中，得到混合液A；其中，混合液A的浓度为2mg/ml；

(II)将混合液A与生理盐水按体积比1:19混合均匀，得到混合液B；

(III)将混合液B与佐剂氢氧化铝凝胶按体积比1：1混合均匀，得到混合液C；其中，佐剂氢氧化铝凝胶的浓度为13mg/ml；