[发明专利]一种牛支原体抗体光激化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法在审
| 申请号： | 201811209344.8 | 申请日： | 2018-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN109724965A | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 梁望旺;吴胜昔;曾政;李俊萱;李令臣;鲁友铭;侯力嘉;蔺露;陈忠琼;徐缘;李红 | 申请（专利权）人： | 重庆市动物疫病预防控制中心;重庆理工大学 |
| 主分类号： | G01N21/76 | 分类号： | G01N21/76;G01N21/64;G01N33/68;G01N33/577 |
| 代理公司： | 重庆博凯知识产权代理有限公司 50212 | 代理人： | 张先芸 |
| 地址： | 401120 重庆市*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 支原体 单克隆抗体 抗体 检测 试剂盒 制备 发光免疫检测 抗原 基因工程技术 细胞融合技术 竞争性结合 山羊抗小鼠 外膜蛋白 灵敏度 磁珠 供体 镍螯 偶联 微珠 洗涤 | ||
1.一种牛支原体抗体光激化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括牛支原体P30蛋白单克隆抗体、山羊抗小鼠IgG偶联的受体微珠、带有His标签的牛支原体P30蛋白抗原和镍螯合的供体磁珠；所述受体微珠具有发光功能，所述供体磁珠具有感光功能；所述牛支原体P30蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述牛支原体抗体光激化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述编码所述牛支原体P30蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种应用权利要求1～2任一项所述牛支原体抗体光激化学发光免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)将山羊抗小鼠IgG偶联的受体微珠和镍螯合的供体磁珠分别用1×AlphaLISA稀释剂将其浓度稀释至100μg/ml；
2)在反应板上分别设置阴性对照组和待检测样品组，向所述待检测样品组中每个孔加入5μL带有His标签的牛支原体P30蛋白抗原、5μL牛支原体P30蛋白单克隆抗体和5μL待测样品；向所述阴性对照组中每个孔加入5μL带有His标签的牛支原体P30蛋白抗原、5μL牛支原体P30蛋白单克隆抗体和5μL去离子水；然后将所述反应板置于微量震荡器上震荡30～60s，混匀后置于23℃培养箱，孵育1h；
3)向步骤2)反应板中阴性对照组和待检测样品组的每个孔中分别加入5μL步骤1)制备的山羊抗小鼠IgG偶联的受体微珠和镍螯合的供体磁珠，然后将所述反应板置于微量震荡器上震荡30～60s，混匀后置于23℃培养箱，避光孵育1h；
4)将步骤3)反应后的反应板置于AlphaScreen/Lisa检测仪上检测信号值；当阴性对照组的检测值大于待检测样品组检测值的2倍时，即待检测样品中含有牛支原体抗体。
4.根据权利要求3所述牛支原体抗体光激化学发光免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述带有His标签的牛支原体P30蛋白抗原的工作浓度为0.5～20μg/ml；所述牛支原体P30蛋白单克隆抗体的工作浓度为0.5～25μg/ml。
5.根据权利要求4所述牛支原体抗体光激化学发光免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述带有His标签的牛支原体P30蛋白抗原工作浓度为2.5μg/ml；所述牛支原体P30蛋白单克隆抗体的工作浓度为5μg/ml。
6.根据权利要求3所述牛支原体抗体光激化学发光免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述AlphaScreen/Lisa检测仪检测时激发光波长为680nm，发射光检测波长为615nm。
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