[发明专利]一种刺梨多糖及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种刺梨多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)原料预处理：将刺梨鲜果清洗，干燥，粉碎；以g和mL分别为质量和体积单位，将刺梨干粉和乙醇按照固液质量体积比1:4～1:6混合，于60～80℃加热回流2～4h，过滤得到残留物，重复加热回流和过滤，残留物干燥；

2)提取：以g和mL分别为质量和体积单位，将经预处理的刺梨干粉按料液质量体积比为1:15～1:35与水混合，于温度为55～95℃下浸提，浸提时间为1.5～3.5h，浸提次数为1～4次；离心分离得到刺梨多糖提取液，减压浓缩到原体积的1/3～1/6，得到刺梨多糖的浓缩液；

3)脱蛋白：采用Sevag法对刺梨多糖浓缩液进行脱蛋白处理，多糖浓缩液与Sevag试剂的体积比为3:1～5:1，振荡20～40min，离心后保留上层糖液；

4)脱色：将步骤3)中脱蛋白后的刺梨多糖提取液减压浓缩到原体积的1/2～1/4，加入大孔树脂，进行脱色处理；浓缩液与大孔树脂的体积比为6～8：1，温度为30～40℃，时间为8～12h，过滤后得到脱色后的多糖滤液；

5)醇沉：将步骤4)中浓缩液加入无水乙醇，调节乙醇的最终体积浓度为65～80％，在0～5℃中静置24～48h，离心得到刺梨多糖沉淀，冷冻干燥后得到刺梨粗多糖；

6)分离纯化：将步骤5)中的刺梨粗多糖加水配成15～25mg/mL溶液，采用离子交换柱层析对刺梨粗多糖进行分离纯化，依次用水和NaCl溶液进行梯度洗脱，控制洗脱液流速为0.5～1.5mL/min，每管收集2.5～7.5mL，分管收集，苯酚硫酸法检测多糖，测定490nm下的吸光度，绘制洗脱曲线，收集同一洗脱峰下的洗脱液，合并后进行浓缩透析，再经过冷冻干燥处理，得到刺梨多糖；

所得刺梨多糖主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖和岩藻糖组成；以摩尔百分比计，所述刺梨多糖的糖苷键包括20％～40％的(1→5)-阿拉伯糖，20％～30％的(1→6)-半乳糖，2％～10％的(1→4)-葡萄糖，10％～20％的(1→3,4)-岩藻糖，还包括1～2％的端基-木糖和2～4％的(1→3,6)-甘露糖；

所述刺梨多糖具有肠道益生功能，增加肠道中双歧杆菌和乳酸菌的数量，降低肠道pH，促进肠道中短链脂肪酸的生成；所述刺梨多糖具有抑制α-葡萄糖甘酶活性功能。

2.根据权利要求1所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，刺梨鲜果清洗后干燥为鼓风干燥，干燥温度低于65℃；所述粉碎后过40-60目筛；所述重复加热回流和过滤的次数为2～5次；所述残留物干燥的温度为45～65℃，时间为24～72h。

3.根据权利要求1所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，所述的离心分离的离心力4000～8000g，离心时间5～15min。

4.根据权利要求1所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，所述的离心后保留上层糖液的离心力4000～8000g，离心处理的时间为10～20min；步骤3)重复振荡和离心处理10～25次。

5.根据权利要求1所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，步骤5)中，所述的离心得到刺梨多糖沉淀的离心力4000～8000g，离心时间为10～20min。

6.根据权利要求1所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，步骤6)中，所述的离子交换柱层析所用填料为DEAE-Sepharose Fast Flow、DEAE-52cellulose、CM-Sepharose FastFlow、SP-Sepharose Fast Flow或Sepharose XL。

7.根据权利要求1所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，步骤6)中，所述浓缩透析是用截留分子量为1000-5000Da的透析袋透析，透析时间为24-48h，透析的温度为0～5℃。

8.根据权利要求1所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，所述Sevag试剂的氯仿和正丁醇体积比为3:1～6:1；所述的大孔树脂为AB-8、大孔树脂D101或聚酰胺树脂；所述的NaCl溶液的浓度为0.1～0.5mol/L。