[发明专利]一类具有保健作用的细脚棒束孢虫草复合种菌种的获得方法

说明书

本发明涉及一类具有保健作用的细脚棒束孢虫草复合种菌种的获得方法，包括：收集野生细脚棒束孢虫草复合种，从野生细脚棒束孢虫草复合种子座顶端部位取子囊，置于预先配制的培养基中培养，获得含有细脚棒束孢虫草菌丝的单倍体菌种。本发明利用野生细脚棒束孢虫草复合种的子座，获得活力强的单孢细脚棒束孢虫草复合种菌种，可分离单孢菌种，具有纯度高、活力强等优点，可利用获得的菌种进行栽培、发酵等，开发保健产品，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于野生菌种领域，特别涉及一类具有保健作用的细脚棒束孢虫草复合种菌种的获得方法。

背景技术

野生的细脚棒束孢虫草复合种Isaria farinose-tenuipes(complex)是一类珍稀的具有保健作用的虫草菌，具有重要的药理、药化作用，子实体和发酵液中可分离出具有抗肿瘤、抗菌和镇静等作用的有效活。目前国内的野生虫草多为冬虫夏草，冬虫夏草目前被列为国家二级保护植物，处于濒危物种，且部分地区冬虫夏草因环境污染导致重金属超标而不能被食用。目前人工栽培的虫草多为蛹虫草(或北冬虫夏草)或蝉花，目前还未有细脚棒束孢虫草复合种的栽培产品，因此开发利用细脚棒束孢虫草复合种是一类充分利用我国虫草资源的重要途径，可以满足百姓日益增长的物质和文化生活需要。

研究发现细脚棒束孢虫草复合种具有重要的药理、药化作用，子实体和发酵液中可分离出具有抗肿瘤、抗菌和镇静等作用的有效活，但目前还未有相关的保健品或药物产品面世，因此找到具有高活性的细脚棒束孢虫草复合种菌种，进行相应的开发研究，是开发细脚棒束孢，进行重大药物生产的前提。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一类具有保健作用的细脚棒束孢虫草复合种菌种的获得方法，该方法获得的单孢菌种具有纯度高、活力强等优点。

本发明提供了一类具有保健作用的细脚棒束孢虫草复合种菌种的获得方法，包括：

收集生长于空气温度为15-28℃、湿度为80-90％、长在峭壁上的野生细脚棒束孢虫草复合种，从野生细脚棒束孢虫草复合种子座顶端部位取子囊，置于预先配制的培养基中，在18-20℃暗光下培养7-10d，获得含有细脚棒束孢虫草复合种菌丝的单倍体菌种。

所述培养基的成分为土豆200g、葡萄糖20g、麦芽汁5mL、蛋白胨8g、牛肉膏6g、酵母膏6g、硫酸镁0.25g、磷酸氢二钾0.5g、琼脂20g、维生素B₁100mg、蒸馏水1000mL，pH6-6.5。

所述培养基的配制步骤如下：土豆煮水过滤，依次加入除维生素B₁之外的其它原料，待完全溶解后定容至1000mL，分装三角瓶后灭菌；灭菌后待培养基冷却至低于45℃时，在超净工作台中加入融化好的维生素B₁，然后用精密试纸调节溶液pH为6-6.5，并在超净工作台中分装试管备用。

对初步获得的细脚棒束孢虫草复合种菌丝进行菌落观察，未发现有其他形态的菌落，然后在40倍物镜下镜检，未发现有锁状联合等形态菌丝，即可判定所获得细脚棒束孢虫草复合种为单倍体菌种。

若发现菌落具有不同形态特征，则挑取需要的菌丝于含有青霉素的培养基(配方：土豆200g煮水、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL，灭菌后冷却至50℃在超净工作台中加入10mg青霉素)中，待7-10d后菌丝生长后再接入普通培养基中(配方：葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL)培养7-10d即可获得纯化的细脚棒束孢虫草复合种菌种。

将获得的单倍体菌种接种于大米或小麦进行栽培生产、固体发酵或液体发酵。

进一步的，所述固体发酵或液体发酵具体为：将获得的单倍体菌种接种于事先灭菌好的培养基中进行发酵培养，获得细脚棒束孢虫草发酵物；所述栽培生产具体为：将获得的单倍体菌种接种于事先灭菌好的大米或小麦培养基中，经40-50d后获得细脚棒束孢虫草子实体。