[发明专利]一种双靶向转换受体、编码基因、重组表达载体、抗肿瘤NK细胞及其制备方法、应用有效
| 申请号： | 201811211324.4 | 申请日： | 2018-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN109280087B | 公开（公告）日： | 2020-05-15 |
| 发明（设计）人： | 朱武凌;李明风;王晓银;张会勇;路臣桂;吕探宇;陈涵;郭长江;牛志远;支灵通 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 453003*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 靶向 转换 受体 编码 基因 重组 表达 载体 肿瘤 nk 细胞 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种双靶向转换受体，其特征在于：其由如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成；如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列是由PD1胞外段，DAP10胞外、跨膜及胞内段组成；如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列为NKG2D全长段。
2.一种双靶向转换受体的编码基因，其特征在于：所述编码基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求2所述的双靶向转换受体的编码基因，其特征在于：所述编码基因包括如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；所述如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列分别由两个启动子启动。
4.根据权利要求3所述的双靶向转换受体的编码基因，其特征在于：所述编码基因包括：CMV启动子-如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列-EF1启动子-如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。
5.一种包含双靶向转换受体编码基因的重组表达载体，其特征在于：其包含双靶向转换受体编码基因，所述双靶向转换受体编码基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示。
6.如权利要求5所述的包含双靶向转换受体编码基因的重组表达载体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：1）合成所述双靶向转换受体编码基因；2）将所述双靶向转换受体编码基因连接到慢病毒表达载体上，即得。
7.一种抗肿瘤NK细胞，其特征在于：其为经双靶向转换受体改造的NK细胞，所述双靶向转换受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
8.如权利要求7所述的抗肿瘤NK细胞的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1）合成所述双靶向转换受体编码基因；2）将所述双靶向转换受体编码基因连接到慢病毒表达载体上，得重组慢病毒表达载体；3）包装所述重组慢病毒表达载体，表达出携带目的质粒的病毒；4）将所述携带目的质粒的病毒侵染NK92细胞，即得。
9.如权利要求1所述的双靶向转换受体或权利要求2-4任一项所述的双靶向转换受体的编码基因在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求5所述的包含双靶向转换受体编码基因的重组表达载体或权利要求7所述的抗肿瘤NK细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。
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