[发明专利]一种玉米细菌性枯萎病菌环介导等温扩增试纸条检测方法

权利要求书

1.一套用于检测玉米细菌性枯萎病菌的环介导等温扩增横向流动试纸条引物组，由玉米细菌性枯萎病菌wtsE基因环介导等温扩增引物组构成，其特征在于，可用于检测玉米细菌性枯萎病菌的环介导等温扩增横向流动试纸条反应；所述玉米细菌性枯萎病菌wtsE基因环介导等温扩增横向流动试纸条引物组，其特征在于，扩增序列在玉米细菌性枯萎病菌wtsE基因保守区选定，由一对外引物（SEQ No.1、SEQ No.2）、一对内引物（SEQ No.3、SEQNo.4）和一对5’端分别标记异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)和生物素（Biotin）的环引物（SEQ No.5、SEQ No.6）组成，其引物序列为：

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2.如权利要求1所述的一种用于玉米细菌性枯萎病菌环介导等温扩增反应体系，其特征在于，主要由玉米细菌性枯萎病菌wtsE基因环介导等温扩增引物组溶液及环介导等温扩增反应预混液、玉米细菌性枯萎病菌阳性质控品和阴性质控品构成；其中环介导等温扩增引物组溶液6μL，环介导等温扩增反应预混液14μL，待测试样、阳性质控品或者阴性质控品各加入5μL；所述的环介导等温扩增反应预混液，可以是使扩增产物发出荧光信号的一种商品化试剂盒Isothermal Master Mix或者等效的其他试剂盒，由Bst聚合酶、dNTP、甜菜碱、MgSO4和缓冲溶液组成；所述玉米细菌性枯萎病菌阳性质控品，是由玉米细菌性枯萎病菌wtsE基因人工合成目的片段的重组质粒构成；所述阴性质控品，为不含玉米细菌性枯萎病菌基因组片段的介质。

3.所述玉米细菌性枯萎病菌环介导等温扩增横向流动试纸条使用方法，其特征在于，如权利要求2所述环介导等温扩增反应体系置于扩增温度66℃，30min后，放置于横向流动试纸条装置内10min，判断试验结果；所述横向流动试纸条，采用层析式双抗体夹心法检测核酸扩增产物；该检测方法的检出限，以玉米细菌性枯萎病菌wtsE基因重组质粒为模板，可达到每个反应50拷贝模板质粒。