[发明专利]一种提高酵母菌耐盐能力的共培养方法

说明书

本发明公开了一种提高酵母菌耐盐能力的共培养方法，属于生物工程技术领域。本发明是将培养好的乳酸菌在培养基中前培养4 h后，再接入酵母菌进行共培养4 h，所获得的菌体点种至含有12%NaCl的酵母菌固体平板上（含氯霉素），酵母菌生物量比未经共培养的细胞数有所提高。本发明方法简单、便于操作，可用于酵母菌的发酵生产。

技术领域

本发明涉及一种提高酵母菌耐盐能力的方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

鲁氏酵母菌属于酵母科中的接合酵母属，是最常见的嗜高渗透压酵母菌，又是传统发酵重要的生产菌，广泛存在于酱油、豆瓣等盐渍食品中。鲁氏酵母在酱油主发酵期发挥作用，主要产生乙醇、高级醇等风味物质，酵母中的谷氨酰胺酶能转化底物生成谷氨酸而增强酱油的鲜味，对发酵调味品的风味起着积极作用。嗜盐四联球菌也是传统发酵食品如酱油、果酱等发酵生产中的重要菌株，是产生挥发性物质的主要微生物之一，具有促进香味成分生成，改善产品品质和口感等功能。利用乳酸菌和酵母菌共培养不仅能缩短产品发酵周期，还能延长产品的货架期，赋予产品潜在的益生性质。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用乳酸菌和酵母菌共培养提高酵母菌耐盐能力的方法。

所述的共培养方法为在共培养系统中，先将乳酸菌经过前培养4h后，再加入酵母菌共同培养4 h。

菌株：鲁氏酵母，保藏于CGMCC-中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.3791，保藏日期为2010年04月29日，分类命名为Zygosaccharomyces rouxii SZ-1；嗜盐四联球菌，保藏于CGMCC-中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.3792，保藏日期为2010年04月29日，分类命名为Tetragenococcus haiophilus SZ-B-2。

种子培养方法：乳酸菌培养基：10 g/L蛋白胨，8 g/L牛肉膏，4 g/L酵母粉，20 g/L葡萄糖，0.1% 山梨醇单油酸酯，2 g/L磷酸氢二钾，5 g/L三水乙酸钠，2 g/L柠檬酸三铵，0.2 g/L七水合硫酸镁，0.2 g/L 四水合硫酸锰，6 %NaCl，pH为6.2；酵母菌培养基：10 g/L酵母粉，20 g/L蛋白胨，20 g/L葡萄糖，6 %NaCl，pH 为6.0。分别取-80℃保藏的1 mL乳酸菌和酵母菌甘油管储存液接种于5 mL乳酸菌培养基和酵母菌培养基中，30℃静置培养24 h，再分别转接种到100 mL乳酸菌培养基和酵母菌培养基中，30℃静置培养24 h。

前培养培养基：10 g/L蛋白胨，8 g/L牛肉膏，4 g/L酵母粉，20 g/L葡萄糖，0.1%山梨醇单油酸酯，2 g/L磷酸氢二钾，5 g/L三水乙酸钠，2 g/L柠檬酸三铵，0.2 g/L七水合硫酸镁，0.2 g/L 四水合硫酸锰，6 %NaCl，pH6.2。

共培养方法：将培养好的乳酸菌培养液以10000 r/min（4℃）离心5 min收集菌体，将菌体重悬于30 mL前培养培养基中30℃静置培养4 h，再将培养好的酵母菌种子液以10000 r/min（4℃）离心5 min收集菌体，并加入到前培养的培养基中共同培养4 h。

耐盐能力的测定：取共培养结束后的菌悬液进行梯度稀释，吸取一定量合适稀释倍数下的菌悬液，接种到含有12 %NaCl酵母菌固体选择培养基（加入0.01%氯霉素）上，30℃静置培养后对菌落计数。

本发明的有益效果：本发明提供的将嗜盐四联球菌提前培养4 h，再与鲁氏酵母共同培养4 h后，鲁氏酵母在高盐（12 %NaCl）胁迫条件下，比对照组（未经过共同培养处理）具有更好的生长性能。本发明提供一种基于乳酸菌和酵母菌共同培养提升酵母菌耐盐能力的方法，简单易行，可用于提高酵母菌在高盐环境中的生长性能。

附图说明

图1为经培养后培养基中酵母菌数。