[发明专利]一种贻贝来源的ACE抑制及抗肿瘤活性肽

权利要求书

1.一种贻贝来源的ACE抑制及抗肿瘤活性肽，其特征在于，所述活性肽其氨基酸序列为Arg-Tyr-Pro-Asp-Pro-Leu。

2.根据权利要求1所述的一种贻贝来源的ACE抑制及抗肿瘤活性肽，其特征在于，所述活性肽具有ACE抑制活性及抗肝癌细胞增殖的活性，可应用于制备具有调节血压及抗肝癌作用的药物方面。

3.根据权利要求1所述的一种贻贝来源的ACE抑制及抗肿瘤活性肽，其特征在于，所述活性肽的分离纯化方法，包括以下步骤：

S1、贻贝酶解低聚肽的制备

贻贝样品处理后，加入15~20倍质量体积的水制成匀浆液置于酶解罐中，然后加入贻贝质量的2~5%的复合蛋白酶，在40～50℃下酶解4小时，酶反应pH 值控制在8.0～9.0，酶解结束后升温至80~90℃灭酶10分钟，得到贻贝蛋白酶解液，将蛋白酶解液8000转/分钟离心10分钟，去除颗粒状物质，然后采用膜分离技术进行分离，截留分子量为3000 Da，过膜液喷雾干燥得贻贝小分子肽粉；所述复合蛋白酶的质量配比为：中性蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶=（2~4）:（3~5）:（3~5）；

S2、小分子活性肽的分离纯化

将S1中的小分子活性肽粗品加水溶解，配制成浓度为100 mg/mL的溶液，采用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱分进行分离纯化，流动相为30%甲醇，流速为0.3 ～0.5 mL/min，洗脱液280 nm或220 nm测定吸光度，根据吸光度值收集所需峰；

采用高效液相色谱进一步纯化，色谱条件如下：C18色谱柱，流动相A为含体积百分数0.05~0.1%三氟乙酸水，流动相B为乙腈，梯度洗脱条件为：0～15 min，3%B，15～20 min，3%～10%B，20～30 min，10%B～20%B，30～40 min，20%B～35%B，流速为1.0 mL/min，检测波长为220或280 nm，收集保留时间在30分钟的色谱峰，浓缩后冷冻干燥得小分子活性肽；

S3、纯度及氨基酸序列测定

收集的小分子肽经液相色谱检测为单一峰，利用高效液相色谱-质谱测定结构，其氨基酸序列为：Arg-Tyr-Pro-Asp-Pro-Leu，其分子量为760.39 Da。

4.根据权利要求3所述的一种贻贝来源的ACE抑制及抗肿瘤活性肽，其特征在于，所述步骤S2中的葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱内径为3.0 cm，柱长100 cm。

5.根据权利要求3所述的一种贻贝来源的ACE抑制及抗肿瘤活性肽，其特征在于，所述C18色谱柱内径为4.6 mm，柱长250 mm，粒度5µm。