[发明专利]制备醋酸奥曲肽的方法

权利要求书

1.制备醋酸奥曲肽的方法，包括如下步骤：

以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应；

用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽；

将还原型奥曲肽用4~6倍的50%冰醋酸溶解，然后用纯化水稀释至含冰醋酸25%，搅拌均匀后过滤，得滤液；在搅拌下向该滤液中滴加饱和碘/冰醋酸溶液，至溶液呈红棕色，继续搅拌30min，再加入用焦亚硫酸钠和碳酸氢钠两者共同饱和的水溶液至红棕色消失；减压浓缩得到经二硫键形成环的奥曲肽粗品；其中，碘的量为还原型奥曲肽的1.5~2.0摩尔倍，焦亚硫酸钠的量为还原型奥曲肽的0.02~0.03摩尔倍；

奥曲肽粗品经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。

2.根据权利要求1的 方法，其中，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：

(1)Boc-Thr(tBu)-OCs的制备

使Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物为Boc-Thr(tBu)-OCs；

(2)Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备

取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs和DMF使进行反应；过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂；

(3)Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：

在步骤(2)的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得；

(4)Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备

在步骤(3)的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干，即得；

(5)Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备

在步骤(4)的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得；

(6)Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备

在步骤(5)的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-D-Trp-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干，即得；

(7)Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备

在步骤(6)的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Phe-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤，抽干，即得；

(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备

在步骤(7)的Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得；

(9)Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备

在步骤(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(tBu)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Fmoc-D-Phe-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得；

(10)Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备

在步骤(9)的Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干；再用无水甲醇洗涤十次，抽干后，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂。