[发明专利]一种HANK细胞培养上清液的制备及其在化妆品中的应用

说明书

本发明属于医药化妆品技术领域，具体涉及一种HANK细胞培养上清液制备及其在化妆品中的应用。HANK细胞培养上清液的制备方法包括以下步骤：(1)采集自体或异体健康人抗凝外周血或脐带血；(2)用淋巴细胞分离液分离单个核细胞；(3)把所得外周血单核细胞悬浮在NK细胞无血清培养液中，添加IL‑2及膜嵌合细胞因子，37℃及CO₂孵箱中培养10‑16天，常温条件下离心分离HANK细胞及其上清液，分别收集HANK细胞及其培养上清液；(4)上清液作为化妆品原料，直接使用，或冻干后备用；HANK细胞另作它用。

技术领域

本发明属于医药化妆品技术领域，具体涉及一种HANK细胞培养上清液，还涉及其制备方法和在化妆品中的应用。

背景技术

高活性NK(HANK)细胞不但具有直接杀灭并清除衰老、癌变、感染、死亡细胞的杀伤作用，而且还可通过其分泌的多种活性因子发挥重要的免疫调节功能。在临床研究及临床应用中已经充分证明，HANK细胞不但可以有效地预防早早癌发生及癌症治疗后复发，而且对白血病及多种实体瘤的有效率高达80％以上；不但可以消减癌症负荷，使原发癌及转移癌缩小或消失，而且还能解除癌症疼痛，缓解癌症疲劳；不但可增强机体免疫力，提升T细胞及NK细胞活性及含量，而且还能抑制自身免疫反应，缓解糖尿病、结肠炎及类风湿等多种自身免疫性疾病；不但能治疗亚健康，改善睡眠、提高精力、增强性功能，而且还有显著的美容及美体效果，大多数患者皮肤变得白里透红、面部拉提紧致、容光焕发；增加食欲，减小腰围。

CIK细胞是最早用于临床治疗的免疫细胞。随着近年来免疫细胞治疗技术的发展，其技术上的滞后性也日渐凸显。欧美等发达国家基本上已经全面停止了CIK的应用。在国内，CIK细胞治疗技术也已基本上被新一代的NK细胞治疗等先进技术所取代。DC-CIK或DCIK是在制备CIK的流程中加上DC细胞，用来刺激CIK细胞的扩增和活化。中国专利申请CN101333515A公开了DCIK细胞培养上清液抗癌，认为，DCIK细胞在培养过程中，产生一系列的细胞因子并分泌于培养上清液中，这些细胞因子通过直接或间接的方式作用于肿瘤细胞，产生抗肿瘤活性。在相当复杂的体内环境中，不但多种细胞因子之间相互影响，效应细胞与靶细胞之间相互作用，而且体液中的其它成分如激素、酶类等也影响细胞在体内的作用。也就是说各种细胞因子的作用并不是孤立存在的，它们之间通过合成分泌的相互调节、受体表达的相互调控、生物学效应的相互影响等复杂交互作用而组成细胞因子网络(Cytokine network)，并受到机体整体的调节。因此，单一细胞因子的临床应用效果常常不能令人满意，而细胞自然产生的混合细胞因子组合则可能取得出奇制胜的效果，当然在评价其生物学活性时，也应特别注重考察其体内实验的结果。至今多数研究仅关注一种或少数几种细胞因子的临床应用，但己开始出现混合细胞因子的临床应用报导(CEL-SCI公司的Eyal Talor)，他们采用PHA刺激人外周血单核细胞的方式培养收获上清液(Multikine)用于抗肿瘤应用，该混合细胞因子可改变肿瘤细胞的细胞周期，从而提高肿瘤细胞对放化疗的敏感性。