[发明专利]NGF单壳-多核微球/PCL纳米纤维导管及其制备方法

权利要求书

1.NGF单壳-多核微球/PCL纳米纤维导管，其特征在于，包括聚乙酸内酯PCL纳米纤维神经中空导管，聚乙酸内酯PCL纳米纤维神经中空导管的内部均匀填充有包埋NGF的单壳-多核微球，其中，所述聚乙酸内酯PCL纳米纤维神经中空导管的内径为0.7mm，聚乙酸内酯PCL纳米纤维神经中空导管的管厚度为0.6mm。

2.NGF单壳-多核微球/PCL纳米纤维导管的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：

步骤1、制备包埋NGF的PLGA微球：

步骤1.1、分别将50～100μg NGF、2～4mg肝素与50～100μL PBS溶液充分混合均匀，制备内水相W1，将200～300mg PLGA充分溶解于200～300μL二氯甲烷中，搅拌，溶解，制备油相；将内水相W1与油相混合并震荡形成乳白色的初乳液W1/O，重读上述步骤3次；

步骤1.2、将步骤1.1得到的初乳液W1/O加入20mL外层水相W2中，初乳液W1/O和外层水相W2震荡形成乳白色的双层终乳液W1/O/W2，重复上述步骤3次；

步骤1.3、将步骤1.2得到的双层终乳液W1/O/W2均匀搅拌充分蒸发有机溶剂二氯甲烷，完全固化溶液中包埋NGF的PLGA微球，经过冲洗、滤过、离心、冰冻干燥，将包埋NGF的PLGA微球冷藏；

步骤2、制备包埋NGF的单壳-多核微球：

步骤2.1、将壳聚糖粉末充分溶解于冰醋酸水溶液中得到浓度为3～5％w/v的壳聚糖溶液；

步骤2.2、将所述步骤1得到的包埋NGF的PLGA微球充分混合于所述步骤2.1得到的壳聚糖溶液中，搅拌均匀，得到包埋PLGA微球的壳聚糖溶液；

步骤2.3、将3～4mL表面活性剂Span80加入200～300mL液体石蜡油中机械搅拌均匀，将步骤2.2得到的包埋PLGA微球的壳聚糖溶液逐滴地加入液体石蜡油中，机械搅拌，得到水/油乳浊液；

步骤2.4、将5～7％w/v离子交联剂三聚磷酸钠STPP溶液逐滴加入步骤2.3得到的水/油乳浊液，机械搅拌一段时间以固化乳浊液中包埋NGF的单壳-多核微球；

步骤2.5、依次使用石油醚、异丙醇以及双蒸水反复清洗乳浊液，得到包埋NGF的单壳-多核微球，冰冻干燥后冷冻储存；

步骤3、制备聚乙酸内酯PCL纳米纤维神经中空导管：

步骤3.1、将三氯甲烷和甲醇溶液按体积比5:1混合为10～15mL三氯甲烷/甲醇混合液，将3～5g聚乙酸内酯PCL充分溶解于三氯甲烷/甲醇混合液中搅拌静置除气后，得到完全溶解的PCL溶液；

步骤3.2、将步骤3.1得到的完全溶解的PCL溶液喷射在静电纺丝装置接收器不锈钢棒上；

步骤3.3、将粘着PCL纤维的不锈钢棒从静电纺丝装置取下，并在酒精中浸泡；从不锈钢棒上取下PCL纤维，剪成PCL纤维段，得到PCL纳米纤维神经中空导管，随后进行Co⁶⁰消毒，备用；

步骤4、制备NGF单壳-多核微球/PCL纳米纤维导管：

将50mg所述步骤2得到的包埋NGF的单壳-多核微球溶解于2～3mLPBS溶液中，然后注射入所述步骤3得到的聚乙酸内酯PCL纳米纤维神经中空导管内，得到NGF单壳-多核微球/PCL纳米纤维导管。

3.根据权利要求2所述的NGF单壳-多核微球/PCL纳米纤维导管的制备方法，其特征在于，所述步骤1.1中将50～100μg NGF、2～4mg肝素与50～100μL PBS溶液充分混合均匀的环境温度控制在4℃条件下，PBS溶液的pH值＝7.4；

将200～300mg PLGA充分溶解于200～300μL二氯甲烷中搅拌时用保鲜膜封闭烧瓶，防止二氯甲烷挥发；

将内水相W1与油相混合并震荡时使用超声细胞粉碎仪超声分散，超声细胞粉碎仪的探针头直径为3mm、超声分散时间30～50s、超声分散功率30～40％。

4.根据权利要求2所述的NGF单壳-多核微球/PCL纳米纤维导管的制备方法，其特征在于，所述步骤1.2中外层水相W2为水溶液和0.2～0.3mL吐温80组成，将初乳液W1/O和外层水相W2震荡时使用超声细胞粉碎机超声分散，超声细胞粉碎仪的探针头直径为3mm、超声分散时间30～50s、超声分散功率30～40％。