[发明专利]一种制备深海弹性蛋白酶Pseudoalterin的方法

权利要求书

1.一种制备深海弹性蛋白酶Pseudoalterin的方法，包括：

将深海细菌Pseudoalteromonas sp. CF6-2种子培养液接种于发酵培养基中，添加甘氨酸母液为诱导剂，进行发酵培养，得到的发酵液透析、离心、洗脱，得到深海细菌弹性蛋白酶；深海细菌Pseudoalteromonas sp.CF6-2菌株分离自中国南海沉积物，2010年7月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址: 武汉大学生命科学院保藏中心，其菌种保藏编号为CCTCC M 2010189。

2.根据权利要求1所述的制备深海弹性蛋白酶Pseudoalterin的方法，其特征在于，深海细菌Pseudoalteromonas sp. CF6-2种子培养液是按如下方法培养得到：将深海细菌Pseudoalteromonas sp. CF6-2菌株接种于液体种子培养基中，在18-22℃条件下振荡培养10-14小时，得到种子培养液；液体种子培养基组分如下，均为重量份：

蛋白胨0.5-1.5份，酵母粉0.1-0.8份，人工海水80-120份，pH为7.5～8.0。

3.根据权利要求2所述的制备深海弹性蛋白酶Pseudoalterin的方法，其特征在于，深海细菌Pseudoalteromonas sp. CF6-2菌株先在固体培养基上活化后再接种于液体种子培养基中，活化温度为18-22℃，活化培养时间为2～3天，固体培养基组分如下，均为重量份：

蛋白胨0.5-1.5份，酵母粉0.1-0.8份，琼脂1.0-2.0份，人工海水80-120份，pH为7.5～8.0。

4.根据权利要求1所述的制备深海弹性蛋白酶Pseudoalterin的方法，其特征在于，深海细菌Pseudoalteromonas sp. CF6-2种子培养液的接种量为0.5-2.5%（v/v）。

5.根据权利要求1所述的制备深海弹性蛋白酶Pseudoalterin的方法，其特征在于，发酵培养温度为18-22℃，转速为150-200 rpm，时间为24～36 h。

6.根据权利要求1所述的制备深海弹性蛋白酶Pseudoalterin的方法，其特征在于，发酵培养基的组分如下，均为重量份：

酵母粉0.1-0.3份，酪素0.4-0.6份，CaCl₂ 0.001-0.008份，Na₂HPO₄ 0.010-0.020份，人工海水80-120份，pH为8.5，甘氨酸母液在发酵培养过程中分次添加。

7.根据权利要求1所述的制备深海弹性蛋白酶Pseudoalterin的方法，其特征在于，甘氨酸母液的浓度为1mol/L，是由7.5 g甘氨酸溶解于人工海水中，用10mol/L的氢氧化钠调节pH至8.5，加人工海水定容至100 mL，过滤除菌得到。

8.根据权利要求6所述的制备深海弹性蛋白酶Pseudoalterin的方法，其特征在于，所述的分次添加为分2-3次添加，分3次添加时，当发酵培养0 h、6 h、12 h时进行添加，每次添加量为2～8mmol/L。