[发明专利]一种预防高胶原蛋白含量基质成冻的前处理方法在审
| 申请号： | 201811220062.8 | 申请日： | 2018-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN109061019A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 王延伟;李飞;钱淼;范增兰;王雷;刘金凤;马媛媛;孙楠楠 | 申请（专利权）人： | 山东省新世纪检测认证中心有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/06 | 分类号： | G01N30/06;G01N30/14 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 杨乐 |
| 地址： | 261061 山东省潍坊*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 前处理 原蛋白 高胶 基质 预防 氢氧化钠溶液 缓冲盐溶液 明胶 蛋白沉淀 蛋白胶体 过滤试验 胶原蛋白 酶解步骤 一步净化 硫酸锌 上清液 乙酸铵 滴加 混匀 酶解 加热 取出 凝结 改进 | ||
1.一种预防高胶原蛋白含量基质成冻的前处理方法，其特征在于，所述方法应用在中华人民共和国国家标准GB/T 22286-2008中，所述方法具体为：
(1)称取5g经捣碎的样品于50ml离心管中，加入18mL 2mol/L的乙酸铵缓冲溶液，pH为5.2，充分混匀，再加50μLβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶以及1g C18粉、120g/L硫酸锌溶液2mL，滴加3-5滴1mol/L氢氧化钠溶液，混匀后，37℃水浴振荡水解12h；
(2)添加100μL 10nV/ml的内标工作液于待测样品中，加盖置于水平振荡器振荡15min，离心10min，取4ml上清液加入0.1mol/L高氯酸溶液5ml，混合均匀，用高氯酸调节pH值到1±0.3，10000r/min冷冻离心10min后，将全部上清液转移到50ml离心管中，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11，加入10ml饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇-乙酸乙酯混合溶液，充分提取，在10000r/min下冷冻离心10min。
2.根据权利要求1所述的预防高胶原蛋白含量基质成冻的前处理方法，其特征在于，所述方法还可以应用于中华人民共和国国家标准GB/T 21313-2007中，具体方法为：
3.准确称取10.0g样品，加入18mL 2mol/L乙酸铵缓冲溶液(PH＝5.2)，1000r/min匀浆1min，再加入β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶溶液100μL以及1g C18粉、120g/L硫酸锌溶液2mL，滴加3-5滴1mol/L氢氧化钠溶液，于37℃下酶解过夜，取出冷却后，用高氯酸调节pH值至1.0，超声振荡20min，取出置于80℃水浴中加热30min，放入冷冻离心机中，10℃10000r/min冷冻离心10min，倾出上清液，残渣再用10ml 0.1mol/L高氯酸溶液提取一次，10000r/min离心，合并上清液，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至4.0，此溶液待过HLB固相萃取柱。
4.根据权利要求1或所述预防高胶原蛋白含量基质成冻的前处理方法，其特征在于，所述乙酸铵缓冲溶液的pH＝5.2。
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