[发明专利]一种温敏性聚合物囊泡及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种温敏性聚合物囊泡，其特征在于，包括：

由两亲性含温敏嵌段聚合物组装而成的囊泡本体，

结合在所述囊泡本体上可靶向牙周膜干细胞的Biotin-CD146单克隆抗体及链霉亲和素，

所述两亲性含温敏嵌段聚合物为聚氧乙烯-嵌段-聚(N-异丙基丙烯酰胺-无规-甲基香豆素甲基丙烯酸羟乙酯)-嵌段-聚丙烯酸；

所述的温敏性聚合物囊泡的制备方法，采用以下步骤：

(1)链转移剂三硫酯的合成：

将磷酸钾按二硫化碳质量比为1:1～3混合加入到第一类溶剂中反应1～3h，加入十二碳硫醇加成反应1～3h，十二碳硫醇与二硫化碳的质量比为1:1～3，加入2-溴异丁酸酯化反应13～24h，2-溴异丁酸与二硫化碳的质量比为1:1～3，经减压蒸馏去除第一类溶剂，经溶解、萃取、洗涤得到亮黄色的三硫酯；

(2)大分子引发剂的合成：

将单甲氧基聚环氧乙烷和4-二甲氨基吡啶按照摩尔比为3～6:1混合后加入到甲苯中，通过共沸蒸馏溶剂来除水，在除水后的溶液中加入步骤(1)所得的三硫酯，二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶对甲苯磺酸盐，按照摩尔比为3～5:8～12:1，与二氯甲烷混合后，在室温下搅拌，反应20h；过滤得到的混合物，将其滤液滴加到冷的正己烷中，沉淀纯化并在室温下真空干燥，制备得到大分子引发剂；

(3)PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)的合成：

将步骤(2)所得的大分子引发剂与N-异丙基丙烯酰胺、香豆素单体按照摩尔比为1:(80～133):(11～20)混合后加入到第二类溶剂中，通入氩气除氧；然后加入自由基引发剂，与大分子引发剂的摩尔比为0.15～0.20:1，通入氩气后将反应密封并浸入70℃的油浴锅中，反应24h后，通过暴露于空气终止反应；处理后得到聚合物PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)；

(4)PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)-b-PtBA的合成：

将步骤(3)所得的聚合物PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)与丙烯酸叔丁酯按照摩尔比为1:(12～16)混合后加入到第二类溶剂中，通入氩气除氧，加入自由基引发剂，与聚合物PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)的摩尔比为0.15～0.20:1，通入氩气后将反应密封并浸入70℃的油浴锅中，反应18～48h后，通过暴露于空气终止反应，处理后得到聚合物PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)-b-PtBA；

(5)PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)-b-PAA的合成：

将步骤(4)所得聚合物PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)-b-PtBA溶解二氯甲烷中，加入摩尔数相当于PtBA的酯基摩尔数5～10倍的三氟乙酸，常温下搅拌，水解4～15h，处理后得到聚合物PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)-b-PAA；

(6)聚合物囊泡的制备步骤：

将步骤(5)所得聚合物PEO-b-P(NIPAM-stat-CMA)-b-PAA溶解在四氢呋喃中，控制浓度为2～5mg/mL，在剧烈搅拌的条件下，以15～45d/min的速度将溶液滴加到两倍于四氢呋喃体积的有硫化氢供体的水溶液中，透析除去四氢呋喃，在紫外光下交联，得到包载有硫化氢供体的温度响应型聚合物囊泡；

(7)囊泡表面抗体连接的步骤：

在步骤(6)所得的包载了有硫化氢供体的聚合物囊泡溶液中加入摩尔比为1:1～2的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，在室温下搅拌30分钟，然后加入链霉亲和素，继续搅拌12h，在去离子水中透析除去副产物；

将Biotin-CD146单克隆抗体按照抗体：链霉亲和素摩尔比1:4～8的比例加入包载了有硫化氢供体的囊泡溶液中，避光搅拌过夜，被生物素修饰过的CD146抗体结合在囊泡表面，制备得到包载硫化氢供体并靶向牙周膜干细胞的温敏性聚合物囊泡。

2.根据权利要求1所述的一种温敏性聚合物囊泡，其特征在于，所述链霉亲和素与所述Biotin-CD146单克隆抗体的摩尔比为4～8:1。

3.根据权利要求1所述的一种温敏性聚合物囊泡，其特征在于，所述温敏性聚合物囊泡的粒径为100～280nm。