[发明专利]一种检测转基因大豆A2704-12的引物、探针及试剂盒和方法在审
| 申请号： | 201811223968.5 | 申请日： | 2018-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN109136341A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 徐俊锋;汪小福;陈笑芸;彭城;徐晓丽;魏巍 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 310021 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因大豆 探针 特异性引物 试剂盒 种检测 引物 单链DNA结合蛋白 链置换DNA聚合酶 核酸外切酶 核苷酸序列 检测试剂 检测引物 探针溶液 探针序列 探针荧光 特异性强 现场检测 信号收集 样品DNA 灵敏度 引物组 重组酶 扩增 检测 | ||
1.一种转基因大豆A2704-12的RPA检测引物，其特征在于，所述的引物包括正向引物F和反向引物R，所述的正向引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.权利要求1所述的RPA检测引物在检测转基因大豆A2704-12种质资源中的应用。
3.一种RPA检测转基因大豆A2704-12种质资源的探针，其特征在于，所述的探针与权利要求1所述的引物配合使用，所述的探针核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.一种转基因大豆A2704-12的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的正向引物F和反向引物R。
5.根据权利要求4所述的一种转基因大豆A2704-12的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求3所述的探针。
6.一种转基因大豆A2704-12的RPA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取待测样品的基因组DNA；
2)配制待测样品的RPA检测反应体系：在200μL PCR反应管内加入模板DNA2μL、检测正反引物溶液各1μL、探针溶液0.5μL、Buffer A溶液23.5μL、BufferB溶液2μL，总体积为30μL；
3)运行RPA扩增与结果判断：将PCR反应管置于荧光检测仪中，37～42℃孵育20min，根据荧光曲线扩增的有无，实时分析扩增结果。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的正反引物和探针溶液的浓度为10μmol/L。
8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的Buffer A包含：50mmol/LTris-HCl、pH 8.4，80mmol/L KAc，2mmol/L DTT，3mmol/L ATP，200μmol/L dNTPs，20mmol/LC4H10N3O5P，100ng/μL creatine kinase，5％20mol/L PEG，600ng/μL SSB，125ng/μL uvsX，25ng/μL uvxY，30ng/μL Bsu和96ng/μL ExoⅢ。
9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的Buffer B为10mmol/L MgAc。
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