[发明专利]抗体的纯化方法、抗体和应用

权利要求书

1.一种抗体的纯化方法，其特征在于，包括：提供含有抗体粗品的细胞发酵液；提供用于层析的缓冲液；然后使用AKTA Avant 150对抗体粗品进行组合层析；所述组合层析依次包括如下步骤:

(a)亲和层析以捕获抗体；

(b)凝胶过滤层析置换Buffer以脱盐；

(c)再次层析分离抗体以对抗体进行精纯处理；

其中，AKTA Avant 150中管路与层析柱的连接方式为：设备的Out1出口连接到Loop环的上样口，将用于步骤(a)的亲和层析柱连在柱位Position3；将用于步骤(b)的凝胶过滤层析柱替换掉Loop环；将用于步骤(c)的层析柱连接在柱位Position 1。

2.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，用于步骤(a)的亲和层析柱中的填料包括Protein A、Protein G或Protein L中的至少一种；优选为Protein A。

3.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，步骤(c)中再次层析分离抗体的方式包括：离子交换层析、亲和层析、羟基磷灰石层析或疏水相互作用层析；

优选地，步骤(c)中再次层析分离抗体的方式为离子交换层析，优选为阳离子交换层析；

优选地，步骤(c)中再次层析分离抗体的方式为疏水相互作用层析。

4.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法还包括将AKTAAvant 150的样品泵的上样入口设置为变量，以用于依次纯化多个抗体样品。

5.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，所述组合层析的流路包括：

(x1)亲和上样：抗体粗品经Sample pump从Injection valve注入管路，流经亲和层析柱与层析柱中填料特异性结合，然后滤液依次经UV monitor、Conductivity monitor和pHvalve流至Fraction collection，进行收集流传液；

(x2)亲和Wash杂质：Buffer A1经System pump A从Injection valve注入管路，流经亲和层析柱洗脱杂质，然后滤液依次经UV monitor、Conductivity monitor和pH valve流至Waste，流出后至废弃液中；

(x3)亲和洗脱抗体和凝胶过滤层析上样：Buffer B1经System pump B从Injectionvalve注入管路后流经亲和层析柱，以用于亲和洗脱被亲和层析柱捕获的抗体，然后带有抗体样品的滤液依次经UV monitor、Conductivity monitor和pH valve流至Outlet valve，峰收集后不经排出重新流回Injection valve并注入凝胶过滤层析柱；

(x4)层析上样：Buffer A2经System pump A从Injection valve注入管路，将抗体样品从凝胶过滤层析柱洗脱的同时上样至步骤(c)使用的层析柱中，滤液依次经UV monitor、Conductivity monitor和pH valve流至Outlet valve，流出后收集滤液；

(x5)层析洗脱：将Buffer A2经System pump A从Injection valve注入管路，同时Buffer B2经System pump B从Injection valve注入管路后流经层析柱进行梯度洗脱，以洗脱与层析柱结合的抗体，然后滤液依次经UV monitor、Conductivity monitor和pHvalve后流至Fraction Collection，流出后收集滤液得到纯化后的抗体。